[发明专利]抗人异常凝血酶原抗体及其应用

说明书

本发明属于抗体领域，具体涉及抗人异常凝血酶原抗体，以及所述抗体用于制备肝细胞癌检测试剂盒的用途。本发明的抗人异常凝血酶原抗体能够特异性结合人异常凝血酶原，能够从原料层面进一步避免来自血清或者血浆中凝血酶原的干扰，也可以进一步避免动物血清制品中其他物种来源异常凝血酶原的干扰，从源头规避相关的风险，降低试剂开发的难度，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及抗人异常凝血酶原抗体及其应用。

背景技术

正常凝血酶原是在肝细胞内由主要依赖维生素K的γ谷氨酰羧化酶及相关辅酶参与下，将结构域N端的第6，7，14，16，19，20，25，26，29和32位的10个谷氨酸(Glu)残基γ羧化为γ-羧基谷氨酸(Gla)，使之成为有活性的正常凝血酶原，上述任何位点的一个或多个Glu残基羧化不全，都可能形成异常凝血酶原(Des-γ-carboxyprothrombin，以下简称DCP)，失去凝血功能。目前将该N端称之为Glu-Gla区域，除了该区域外，正常凝血酶原和异常凝血酶原在结构上没有其他不同，均由凝血酶原片段F1、凝血酶原片段F2及C端的凝血酶区域组成。DCP，又名维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导的蛋白质(Protein induced by vitamin Kabsence-II,PIVKA-II)。其含量升高多见于维生素K缺乏、使用华法林治疗及肝细胞癌(以下简称HCC)患者，因此DCP被认为可以作为HCC的诊断标志物。近几年来，随着更多研究工作的开展，DCP在HCC的临床应用价值得到普遍认可，被纳入各种权威指南中，推荐用于高危人群的筛查、肝癌的辅助诊断、治疗效果监测、及作为预后和复发的预测工具。

随着DCP临床应用价值的被认可，各式各样的免疫检测方法应运而生，而免疫检测方法的灵敏度和特异性对于DCP应用于临床诊断的重要性毋庸置疑。当采用的抗体和样本中的DCP之外的其他抗原或者物质发生非特异的相互作用时，便会增加假阳性诊断的可能，提高个体不能得到准确诊断的风险，因此检测方法中所采用的抗体是否特异结合人样本中的DCP是保障其免疫检测方法灵敏度和特异性的关键。

在日本特开昭60-60557号公报和日本特开平5-249108号公报中，分别报道了利用特异性识别DCP单克隆抗体MU-3(17-27aa)和抗凝血酶原的兔多克隆抗体进行测定的免疫检测方法,前者把特异性识别DCP单克隆抗体MU-3(17-27aa)作为包被，避免了样本预处理环节，简化了流程，使DCP的检测方法相较早期放免方法更为实用，而后者将特异识别DCP单克隆抗体MU-3(17-27aa)调整为标记，减少样本中凝血酶原干扰以便获得更稳定的检测数据；在专利US9120862B2中报道的免疫检测方法中采用了一株特异识别DCP的单克隆抗体3C10(13-27aa)和一株抗凝血酶原抗体6H6(1-13aa)；在专利CN 104520710 B中报道的免疫检测方法则是采用了一株特异识别DCP的抗体MU-3(17-27aa)、一株特异识别凝血酶原F1片段抗体hPTN7-2和一株特异识别凝血酶原F2抗体20B8，通过三株抗体的联合应用，尤其是F1及F2片段抗体的按比例使用，建立了血清/血浆相关性高的检测系统；在其他出版物中，H.Kinukawa et al.Clinical Biochemistry xxx(2015)xxx–xxx公开了一种DCP免疫检测方法，采用了特异识别DCP的3C10(13-27aa)抗体，同时结合另外一株抗凝血酶原抗体MCA1-8(33-46aa)构建了DCP的化学发光检测试剂。

目前的研究主要围绕采用识别DCP特定表位的抗体及凝血酶原的抗体搭配检测DCP或者相应抗体的应用办法，尚无特异性检测人DCP抗体的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供了一种新的氨基酸序列的抗人异常凝血酶原抗体，含有编码该抗体的核酸的载体、转基因细胞系、重组菌、重组病毒以及该抗体在制备用于检测人异常凝血酶原试剂盒中的应用，解决了上述背景技术中的问题。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：