[发明专利]一种大肠杆菌及应用

说明书

本发明涉及微生物应用领域，特别公开了一种大肠杆菌及应用。该大肠杆菌，其特征在于：采用购自生工生物工程（上海）股份有限公司的大肠杆菌DH5α作为原始菌株，将其按千分之一的接种量接种至LB培养基中，种瓶装量100mL/500mL，放入摇床中，于37℃、200rpm条件下培养24h，得到大肠杆菌。本发明提供了一种大肠杆菌DH5α，其可将胆酸12位的羟基氧化，合成12‑oxo‑鹅去氧胆酸，转化率可达到100%。

技术领域

本发明涉及微生物应用领域，特别涉及一种大肠杆菌及应用。

背景技术

熊去氧胆酸(Ursodeoxycholic Acid)，化学名3α,7β-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸。熊去氧胆酸作为一种名贵的药材，可促进内源性胆汁酸的分泌，减少重吸收；拮抗疏水性胆汁酸的细胞毒作用，保护肝细胞膜；溶解胆固醇性结石，并具有免疫调节作用，是保肝抗炎的常用药品。2015年我国熊去氧胆酸市场有8.5亿左右，但95％医院市场为进口产品，德国福克大药厂市场占有率最大，2015年其熊去氧胆酸(商品名为优思弗)在中国的销售额达6.6亿人民币。因此提供一种高效、简便的制备熊去氧胆酸的方法是非常必要的。

近年来，鉴于化学法合成的低效性和对环境的严重污染，生物法成为新兴的熊去氧胆酸的合成方法，胆酸、鹅去氧胆酸、脱氢胆酸作为合成熊去氧胆酸的底物也备受关注。其中，以胆酸为底物合成熊去氧胆酸是最为廉价的方法。使用胆酸为底物合成熊去氧胆酸的合成方案是首先将胆酸的12位的羟基进行氧化，再通过黄鸣龙反应除去12位的羰基氧生成鹅去氧胆酸，接着，使用7α-羟基类固醇脱氢酶和7β-羟基类固醇脱氢酶对7位的羟基进行差向异构化，最终获得鹅去氧胆酸的差向异构体——熊去氧胆酸。

目前将胆酸12位的羟基氧化合成12-oxo-鹅去氧胆酸 (12-oxo-CDCA) 所采用的生物方法为利用12α-羟基类固醇脱氢酶使胆酸12位的羟基氧化从而合成12-oxo-鹅去氧胆酸。

大肠杆菌是应用最为广泛的外源基因表达系统之一。E.coli DH5α由于转化率高是基因工程中最常用的宿主菌之一。本发明中所用大肠杆菌可以将胆酸氧化合成12-oxo-鹅去氧胆酸。

发明内容

本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种大肠杆菌及其应用。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种大肠杆菌，其特征在于：采用购自生工生物工程（上海）股份有限公司的大肠杆菌DH5α作为原始菌株，将其按千分之一的接种量接种至LB培养基中，种瓶装量100mL/500mL，放入摇床中，于37℃、200rpm条件下培养24h，得到大肠杆菌。

本发明还公开了上述大肠杆菌在胆酸转化为12-oxo-鹅去氧胆酸中的应用。

优选的，所述大肠杆菌在pH6.0-8.0、温度30-37℃，将胆酸转化为12-oxo-鹅去氧胆酸。

进一步优选的，胆酸量在10g/L时，3g大肠杆菌DH5α菌体，胆酸转化反应完全需要2.5h。

本发明提供了一种大肠杆菌DH5α，其可将胆酸12位的羟基氧化，合成12-oxo-鹅去氧胆酸，转化率可达到100%。

附图说明

下面结合附图对本发明作进一步的说明。

图1为本发明反应产物的薄层层析检测图；

图2为本发明反应产物的蒸发光检测图谱；

图3为本发明反应产物的质谱法检测图谱；

图4为本发明反应产物的核磁共振普法检测图谱。

图1中，CA为胆酸对照，1-6为不同反应时间的样品。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明，以便于对本发明的理解，但并不是对本发明的限制。