[发明专利]复制型人3型腺病毒作为表达载体在制备猪用疫苗中的应用

说明书

本发明涉及一种复制型人3型腺病毒作为表达载体在制备猪用疫苗中的应用。本发明首次尝试用复制型人3型腺病毒作为表达载体表达外源蛋白如病毒抗原以制备猪用疫苗。我们构建了多种型别的复制型人腺病毒载体，包括人3型、4型、7型、55型腺病毒载体，在E3区插入外源基因表达框EGFP，并用该四种复制型腺病毒载体感染猪细胞，比较发现人3型腺病毒载体在猪细胞内能够更高效地复制载体基因组，表达外源基因效率更高，且人3型腺病毒载体在猪细胞中产生的感染性子代滴度明显更低。

技术领域

本发明涉及动物疫苗领域，特别是涉及一种复制型人3型腺病毒作为表达载体在制备猪用疫苗中的应用。

背景技术

畜牧业在中国农业中占有重要的地位，其中养猪业又是畜牧业中最大的行业。多年来猪肉产量一直居世界零线，中国猪肉的生产、需求和贸易状况对世界猪肉市场有着重要的影响，同时，养猪业也是中国农民收入的一个重要来源。目前，中国生猪饲养从单一的传统农户散养发展到农户散养、专业户饲养和集体规模化饲养3种方式并存。在实际生产过程中根据饲养区域和气候环境的不同，因地制宜而选择适宜的饲养模式。规模化饲养由于猪只集中，这对于控制和消灭传染病带来了有利的条件，但是猪只集中，也造成疫病容易发生的机会。因此，要保证大群猪只的健康，规模化猪场必须坚持“预防为主，防重于治”的方针。

而预防猪群中疾病发生常采用的方式就是疫苗免疫，疫苗是兽医学中最有效的预防工具，传统的疫苗包括灭活疫苗、弱毒疫苗和亚单位疫苗。灭活疫苗也称“死苗”，含有处理过不能复制的微生物，它们不能在细胞质中刺激蛋白产生，因此病毒抗原不能被MHC-I类分子呈递，不能产生细胞毒性CD8+T细胞。弱毒疫苗在诱导包括细胞毒性CD8+T细胞在内很大数量的相关效应机制方面通常效力较高，但弱毒疫苗有时有残余毒力，或通过突变成为有致病性的毒株重新出现。亚单位疫苗本身要比依靠整个微生物制备的疫苗安全，但是他们的免疫原性不强。为了降低免疫成本，理想的疫苗应该具有接种次数较少、免疫持续期较长的优点，且应该安全不引起副反应，以及确保疫苗病毒毒力不会返强。近期已采用基因工程技术改进和设计新型疫苗，例如腺病毒可诱导抗插入外源基因编码抗原的体液、黏膜和细胞免疫应答，已成为表达和运送外源免疫蛋白的候选载体之一，用于开发各种疫苗产品。目前，猪常用疫苗有猪瘟疫苗、猪丹毒疫苗、猪乙型脑炎疫苗、猪细小病毒疫苗、猪O型口蹄疫疫苗、猪圆环病毒疫苗、猪链球菌病疫苗、猪蓝耳病疫苗、猪流感疫苗、猪伪狂犬病疫苗等等

但是，在猪用疫苗领域，目前一般使用复制缺陷型腺病毒如人5型腺病毒作为猪用疫苗载体，这种载体在正常细胞和动物体内其基因组不能复制，导致其表达效率较低，使用剂量较高，因此免疫成本较高。

发明内容

基于此，本发明提供了复制型人3型腺病毒作为表达载体在制备猪用疫苗中的应用，其能够在猪体内更高效地表达外源基因且安全性较高。