[发明专利]兼具防控黄曲霉及毒素与增加固氮酶活根瘤数方法及应用

权利要求书

1.兼具防控黄曲霉及其毒素与增加豆科根部固氮酶活性根瘤数量的方法，其特征在于：包括：获取具有黄曲霉及其毒素防控效果的解淀粉芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和路德维希肠杆菌；将解淀粉芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌中的2种或3种与路德维希肠杆菌混合后，施入豆科作物田间，增加豆科作物根部固氮酶活性根瘤数量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：具体步骤为：获取具有黄曲霉及其毒素防控效果的解淀粉芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和路德维希肠杆菌；批量培养解淀粉芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、路德维希肠杆菌4种微生物菌株，再将解淀粉芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌中的任意2种或者3种与路德维希肠杆菌混合，施入豆科作物田间，由此有效防控黄曲霉及其毒素水平，又增加豆科作物根部固氮酶活性根瘤数量。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：具体步骤为：获取具有黄曲霉及其毒素防控效果的解淀粉芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和路德维希肠杆菌的方法为：通过检测待筛选菌株处理后的黄曲霉毒素含量和/或黄曲霉含量，比较处理和未处理的黄曲霉毒素和/或黄曲霉含量差异，获得具有黄曲霉及其毒素防控效果的防控菌；

或为：通过一步式高效筛选黄曲霉毒素防控菌的方法，获得具有黄曲霉及其毒素防控效果的防控菌，

所述的一步式高效筛选黄曲霉毒素防控菌的方法为：测定候选黄曲霉毒素生防菌试验处理组和对照组指示分子AFT-YJFZ01含量，计算生防菌对指示分子AFT-YJFZ01抑制率，根据指示分子AFT-YJFZ01抑制率结果，高效筛选黄曲霉毒素防控菌，所述的指示分子AFT-YJFZ01氨基酸序列如SEQ ID NO.1 所示；抑制率越高，则表明其同时抑制黄曲霉毒素源头合成及抑制产毒菌生长的效果越好，从而筛选出效果较好的黄曲霉毒素防控菌：解淀粉芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、路德维希肠杆菌。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：一步式高效筛选黄曲霉毒素防控菌的方法中黄曲霉毒素生防菌试验处理组和对照组通过如下步骤实现：花生仁粉末、黄曲霉产毒菌孢子、系列候选防控菌混合在培养基中培养一定时间，获得试验处理组，其中用培养基代替候选防控菌培养一定时间则获得对照组；

所述的花生仁粉末是中花6号、鲁花8号品种去壳后研磨制成的粉末状产物；

所述的黄曲霉产毒菌孢子是5×10⁵ cfu/mL及以上的黄曲霉产毒菌孢子液；所述的培养基是液态的沙氏培养基；

所述的指示分子AFT-YJFZ01含量通过如下步骤实现：

a处理组与对照组培养一定时间后，对培养物充分匀浆，制备成待测溶液，加入到孔底包被有指示分子AFT-YJFZ01的纳米抗体或单克隆抗体的酶标板的孔中，反应，洗板；

b加入指示分子AFT-YJFZ01多克隆抗体反应，洗板；

c加入与指示分子AFT-YJFZ01多克隆抗体发生结合反应的辣根过氧化物酶标记抗体，反应，洗板；

d加入显色液反应；加入终止液，酶标仪读取并计算待测溶液中AFT-YJFZ01的含量；

用系列浓度的起标准物质作用的指示分子AFT-YJFZ01纯品溶液，替换待测溶液，用于制作标准曲线，再根据酶标仪读数计算指示分子AFT-YJFZ01含量。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的批量培养是常规细菌培养基放大培养的方法；所述的4种微生物菌株通过常规方法从花生荚果或者其根际土壤分离获得，或从大豆根部或者其根际土壤分离获得。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：混合比例指任意一种菌株在混合后的活菌数比例大于等于1%。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的施入豆科作物田间，为将混合的微生物菌株伴随作物基肥施入田间，或在作物生长期施入田间，施用量每亩大于等于1000亿活菌数。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的豆科作物包括花生、大豆、苜蓿草、紫云英。