[发明专利]一种烟酰胺核糖激酶突变体及其编码基因和应用

权利要求书

1.一种烟酰胺核糖激酶突变体，其特征在于，所述的烟酰胺核糖激酶突变体的氨基酸序列与氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的野生型烟酰胺核糖激酶相比，具体选自：

（1）当SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的第22位由天冬酰胺突变为半胱氨酸，第178位由苯丙氨酸突变为半胱氨酸，所述的烟酰胺核糖激酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；

或，（2）当SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的第104位由天冬酰胺突变为半胱氨酸，第157位由谷氨酸突变为半胱氨酸，所述的烟酰胺核糖激酶突变体的氨基酸序列如SEQ IDNO:6所示；

或，（3）当SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的第22位由天冬酰胺突变为半胱氨酸，第178位由苯丙氨酸突变为半胱氨酸，第52位由苯丙氨酸突变为半胱氨酸，第146位的组氨酸突变为半胱氨酸，所述的烟酰胺核糖激酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示；

或，（4）当SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的第104位由天冬酰胺突变为半胱氨酸，第157位由谷氨酸突变为半胱氨酸，第52位由苯丙氨酸突变为半胱氨酸，第146位的组氨酸突变为半胱氨酸，所述的烟酰胺核糖激酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示；

或，（5）当SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的第115位由丝氨酸突变为半胱氨酸，第165位由缬氨酸突变为半胱氨酸，第52位由苯丙氨酸突变为半胱氨酸，第146位的组氨酸突变为半胱氨酸，所述的烟酰胺核糖激酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示。

2.权利要求1所述的烟酰胺核糖激酶突变体的编码基因，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的烟酰胺核糖激酶突变体的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；

或，氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示的烟酰胺核糖激酶突变体的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；

或，氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示的烟酰胺核糖激酶突变体的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；

或，氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示的烟酰胺核糖激酶突变体的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示；

或，氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示的烟酰胺核糖激酶突变体的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示。

3.含有权利要求2所述的编码基因的载体。

4.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，所述的载体为pET 表达载体、pCW表达载体、pUC表达载体或pPIC9k表达载体。

5.含有权利要求2所述的编码基因的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞为大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌或毕赤酵母。

6.一种制备烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：

S1.配置反应体系，包含：0.5-10g/L权利要求1-3任一项所述的烟酰胺核糖激酶突变体，50mM pH6.0-8.0 磷酸钠缓冲液，5mM ATP或ADP，10-50g/L烟酰胺核糖，50mM六偏磷酸钠，50mM七水硫酸镁；控制反应体系温度在35-40℃，进行搅拌反应；

S2.反应4h后进行HPLC检测；经过纯化后得烟酰胺单核苷酸。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：

S1.配置反应体系，包含：0.5-1g/L权利要求1-3任一项所述的烟酰胺核糖激酶突变体，50mM pH6.5 磷酸钠缓冲液，5mM ATP，10-50g/L烟酰胺核糖，50mM六偏磷酸钠，50mM七水硫酸镁；控制反应体系温度在40℃，进行搅拌反应；

S2.反应4h后进行HPLC检测；经过纯化后得烟酰胺单核苷酸。