[发明专利]人工重组的H7N9流感病毒及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种人工重组的H7N9流感病毒及制备方法和应用。本发明的人工重组的H7N9流感病毒具有高致病性禽流感病毒A/chicken/Yunnan/SD024/2021(H7N9)表面抗原血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因，但HA裂解位点氨基酸序列为‑PKGR‑，具有流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的PB2，PB1，PA，NP，M和NS共6个内部基因，株号为H7‑Re4，保藏号为CCTCC NO：V202161。该毒株具有良好的鸡胚适应性，病毒生长滴度与野毒相比，可提高9倍以上；以此为疫苗株生产疫苗，可大大降低疫苗生产成本，提高疫苗质量。

技术领域

本发明涉及反向遗传学技术和动物传染病技术领域，具体涉及一种人工重组并致弱的 H7N9亚型重组流感病毒及其制备方法和应用。

背景技术

禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)是一种能广泛感染禽类和哺乳动物的分节段的负 链RNA病毒。根据病毒的表面蛋白，AIV被分为16个血凝素(HA)和9个神经氨酸酶(NA) 亚型。其中，H5和H7亚型AIV可在家禽或野鸟中引起疫情，导致重大经济损失，也可感 染人类，引起公共卫生危害。中国研制出一系列全病毒灭活苗，成功控制了2004年以来的 H5亚型和2017年以来H7N9亚型禽流感。

为应对该类H7N9抗原变异株可能引起的家禽疫情和公共卫生危害，本发明进行了人工 重组的H7N9禽流感疫苗株的研制。

理想的流感病毒疫苗株应具备与流行株良好的抗原匹配性，对鸡胚无致病力及鸡胚高滴 度生长性等条件。然而，很难从自然界分离具备上述条件的流感毒株作为疫苗株。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为：提供一种人工重组的H7N9流感病毒及其制备方法和应 用。

本发明的技术方案为：人工重组的H7N9流感病毒，以H7N9亚型禽流感病毒 A/chicken/Yunnan/SD024/2021(H7N9)为表面抗原血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因供 体，但HA裂解位点氨基酸序列为-PKGR-；以流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的PB2，PB1，PA， NP，M和NS基因作为重组病毒6个内部基因供体，通过反向遗传操作方法，人工制造得到 了1株重组的H7N9禽流感病毒，命名为A型流感病毒A/Harbin/H7-Re4/2021(H7N9)(简称 为H7-Re4株)，保藏在位于中国典型培养物保藏中心，地址在中国武汉的武汉大学，其保藏 号为CCTCC NO：V202161，保藏时间为2021年8月3日。

本发明选用流感病毒的可在鸡胚内生长至很高滴度的实验室鸡胚适应株A/PR/8/34 (H1N1)的6个内部基因作为骨架基因，并选用2021年分离得到的禽流感病毒株 A/chicken/Yunnan/SD024/2021(H7N9)的HA和NA基因作为表面基因，利用反向遗传学人工 构建方法，制备了重组病毒H7-Re4株，该重组毒株将可以作为H7N9流感的疫苗株。

实验证实，H7-Re4与我国H7N9流感病毒流行株A/chicken/Yunnan/SD024/2021(H7N9) 抗原性一致，将对H7N9流感病毒流行株A/chicken/Yunnan/SD024/2021(H7N9)产生良好的特 异保护性。该病毒含有流感病毒鸡胚高滴度适应株A/PR/8/34(H1N1)的6个内部基因，因此 具有良好的鸡胚适应性，病毒生长滴度与野毒相比，可提高9倍以上；以此为疫苗株生产疫 苗，可大大降低疫苗生产成本，提高疫苗质量。

因此，进一步的，本发明还提出了所述的重组的H7N9禽流感病毒在制备预防H7N9流 感病毒所导致疾病的药物中的应用。

进一步地，所述H7N9禽流感病毒为A/chicken/Yunnan/SD024/2021(H7N9)毒株。

更进一步的，本发明还提出了一种构建所述的重组的H7N9禽流感病毒的方法，该方法 包括：