[发明专利]一种促进脂肪沉积的微生物菌剂及其分离方法与应用

说明书

本发明属于微生物菌剂技术领域，公开了一种促进脂肪沉积的微生物菌剂及其分离方法与应用，促进脂肪沉积的微生物菌剂为宁乡猪粪便分离的约氏乳杆菌(保藏号：CCTCC M 20211241)；促进脂肪沉积的微生物菌剂的验证方法包括：选取体重为36.5g、健康状况相似的ICR雄鼠分为3个组：对照组，高脂组和高脂+约氏乳杆菌灌胃组，每组10只小鼠；约氏乳杆菌灌胃组为每日上午9：00进行，灌胃量为0.3ml/只，菌液浓度为1×10^9CFU/ml；鼠房采用12h光照和12h黑暗循环的管理方法，温度和湿度适宜，自由饮水和采食。实验结果表明，本发明提供的宁乡猪粪便来源约氏乳杆菌可以促进脂肪在机体的沉积。

技术领域

本发明属于微生物菌剂技术领域，尤其涉及一种促进脂肪沉积的微生物菌剂及其分离方法与应用。

背景技术

目前，我国是猪肉生产和消费大国，生猪养殖在国民经济发展中具有重要基础战略地位。随着改革开放40年的发展，人们生活水平的提高，市场对猪肉需求量不断增长，对猪肉的品质也提出了更高的要求。而肌内脂肪是影响肉质和口感的重要影响因素。近年来，商品猪大多追求屠宰性能和瘦肉率，瘦肉率高达60％以上，肌内脂肪含量却小于2.5％，极大影响了猪肉品质和口感。另外，肠道微生物在脂质代谢中的作用越来越受到关注，研究发现肠道微生物参与猪肉质和脂质代谢，同时可作为潜在的靶点用于调控猪脂质代谢及肉品质。但现有技术中关于促进脂肪沉积的微生物菌剂尚未见报道。因此，亟需一种新的促进脂肪沉积的微生物菌剂，以弥补现有技术空白。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：目前，关于研究促进动物机体肪沉积的研究较少，且现有技术中关于促进脂肪沉积的微生物菌剂尚未见报道。

解决以上问题及缺陷的难度为：该菌剂利用16S rDNA测序技术从宁乡猪肠道中筛选，并与血清脂质进行关联分析，筛选差异菌株进行实验。本实验难点在于16S rDNA测序技术的掌握与数据分析，Pearson关联分析等技术。

解决以上问题及缺陷的意义为：该菌剂可提高机体的脂肪含量以及血清中脂质的含量。该结果可应用于瘦肉型猪的养殖，可促进瘦肉型猪脂肪的沉积，改善肉质和口感。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种促进脂肪沉积的微生物菌剂及其分离方法。

本发明是这样实现的，一种促进脂肪沉积的微生物菌剂，所述促进脂肪沉积的微生物菌剂为宁乡猪粪便分离的约氏乳杆菌，保藏单位：武汉大学菌种保藏中心(CCTCC)，保藏日期：2021年9月29日，保藏号：CCTCC M 20211241。使用剂量为1×10⁹CFU/ml。

本发明的另一目的在于提供一种所述的促进脂肪沉积的微生物菌剂的分离方法。取健康宁乡猪粪便0.1g，用5mL无菌PBS溶解、振荡混匀，梯度稀释至10^-7，吸取100μL梯度在10^-2～10^-7的稀释液涂布于添加0.5％L-半胱氨酸MRS平板中，置于5％二氧化碳、37℃恒温培养箱培养48h。选择稀释梯度合适的平板，挑取不同形态的单菌落，并利用扩增细菌16SrDNA基因通用引物为27-FAGAGTTTGATCCTGGCTCAG和1492R-GGTTACCTTGTTACGACTT进行菌落PCR鉴定。

本发明的另一目的在于提供一种所述的促进脂肪沉积的微生物菌剂在制备促进脂肪沉积组合物中的应用。

本发明的另一目的在于提供一种验证所述的促进脂肪沉积的微生物菌剂药效的动物模型构建方法，所述动物模型构建方法包括：

(1)选取体重相近，健康状况相似的ICR雄鼠30只，分为3个组：对照组，高脂组和高脂+约氏乳杆菌灌胃组，每组10只小鼠；

(2)约氏乳杆菌灌胃组为每日上午9：00进行，灌胃量为0.3ml/只，菌液浓度为1×10^9CFU/ml；