[发明专利]一种寡肽-34的合成方法

说明书

本发明公开了一种寡肽‑34的合成方法，包括先制备Fmoc‑Gly‑二氯三苯甲基树脂，基于该树脂固相合成寡肽‑34片段肽树脂，随后制备寡肽‑34肽链片段，并采用液相合成制备全保护多肽寡肽‑34，最后制备寡肽‑34，即可。本发明的合成方法采用固相合成与液相合成相结合的方式，有效解决了多肽固相合成C端Gly‑Asp形成内酯六元环副反应的发生，提高了产品的收率和纯度。

技术领域

本发明属于寡肽的制备工艺领域，尤其涉及一种寡肽-34的合成方法。

背景技术

寡肽-34是一种合成肽，含有13种氨基酸，包括精氨酸、天冬氨酸、异亮氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸和色氨酸。在化妆品中应用具有亮肤、美白、淡斑等效用，能够降低黑色素细胞的黑色素合成和酪氨酸酶活性，减少黑素体向新角质形成细胞的转移，减少色素沉着，对色素斑有明显的增白作用。

寡肽-34序列为Ile-Trp-Ser-Leu-Asp-Thr-Gln-Tyr-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp，现有的多肽固相合成从碳端asp开始合成，当接完fmoc-gly-cooh，用哌啶脱除fmoc时，在哌啶弱碱催化下很容易发生游离-NH₂基对分子内的C末端酯键的氨解反应，导致Gly-Asp形成六元环，进而将多肽在树脂载体上连根拔起，致使后续反应无法进行。

发明内容

发明目的：本发明的目的是提供一种新型的寡肽-34的合成方法，该方法能够有效解决多肽固相合成C端Gly-Asp形成内酯六元环副反应。

技术方案：本发明寡肽-34的合成方法，包括如下步骤：

（1）制备Fmoc-Gly-二氯三苯甲基树脂：按摩尔比1:1.1-1.5将二氯三苯甲基树脂与Fmoc-Gly-OH混合反应制得Fmoc-Gly-二氯三苯甲基树脂；

（2）固相合成寡肽-34片段肽树脂：基于Fmoc-Gly-二氯三苯甲基树脂，偶联Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly–OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH及Boc-Ile-OH，制得寡肽-34片段肽树脂；其中，所述Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly–OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH及Boc-Ile-OH与二氯三苯甲基树脂的摩尔比均为1.8-2.5:1；

（3）制备寡肽-34肽链片段：将寡肽-34片段肽树脂加入三氟乙酸和二氯甲烷的混合液中，反应后过滤掉树脂并调节其pH至中性，旋干制得寡肽-34肽链片段；其中，所述三氟乙酸和二氯甲烷的混合液与二氯三苯甲基树脂的体积质量比为8-15:1；

（4）液相合成制备全保护多肽寡肽-34：溶解寡肽-34肽链片段后，加入H-Asp(OtBu)-OtBu.HCl、PyBop、1-羟基苯并三唑及N,N-二异丙基乙胺，搅拌反应4-5 h，经萃取、洗涤、干燥浓缩制得油状的全保护多肽寡肽-34；其中，所述H-Asp(OtBu)-OtBu.HCl与二氯三苯甲基树脂的摩尔比为2-3:1，PyBop与二氯三苯甲基树脂的摩尔比为1.8-2.5:1，1-羟基苯并三唑与二氯三苯甲基树脂的摩尔比为1.8-2.5:1，N,N-二异丙基乙胺与二氯三苯甲基树脂的摩尔比为3-6:1；

（5）制备寡肽-34：切除全保护多肽寡肽-34上的侧链保护基团，制得寡肽-34。