[发明专利]一种产耐高温谷氨酰胺转胺酶yzk06菌株及其应用

权利要求书

1.一种产耐高温谷氨酰胺转胺酶yzk06菌株，分类命名为酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），于2021年9月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No：23344，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

2.权利要求1所述的产耐高温谷氨酰胺转胺酶yzk06菌株在制备耐高温谷氨酰胺转胺酶中的应用。

3.权利要求2所述的产耐高温谷氨酰胺转胺酶yzk06菌株在制备耐高温谷氨酰胺转胺酶中的应用方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）对yzk06菌株活化：

无菌条件下，将yzk06菌株接种至培养基上，28℃培养24～36h，得活化的酿酒酵母yzk06菌株；

所述的培养基为麦芽汁150mL、琼脂3g，121℃灭菌20min；

（2）制备发酵种子液：

将活化的酿酒酵母yzk06菌株转接移至种子培养基中，在温度28℃、转速150～180r/min，培养24～36h，得发酵种子液；

所述的种子培养基，将10g酵母膏和20g蛋白胨用水溶解，121℃灭菌20min，加入100ml含20g葡萄糖灭菌溶液，再用灭菌蒸馏水定容至1000mL，pH6.5；

（3）发酵生产谷氨酰胺转胺酶粗酶混合液：

将发酵种子液按发酵培养基体积8%接种于发酵培养基中，pH6.5，发酵温度28℃，培养24～72h，得酿酒酵母yzk06菌株发酵产含培养基的耐高温谷氨酰胺转胺酶粗酶混合液；

所述的发酵培养基为葡萄糖20g，蔗糖20g，蛋白胨15g，酵母浸出物15g，磷酸二氢钾1g，磷酸氢二钾1g，7水硫酸镁0.5g，蒸馏水定容至1000mL，121℃灭菌20min，pH6.5；

（4）粗酶混合液固液分离：

粗酶混合液采用板框压滤机过滤实现固液分离，收集分离后的粗酶混合液；

（5）盐析纯化：

发酵粗酶液用硫酸氨盐析纯化，首先向发酵粗酶液中加入等体积的饱和度为30％的硫酸铵，搅拌均匀，静置，去除沉淀，得第一上清液；再向第一上清液中加入等体积的饱和度为60％的硫酸铵，搅拌均匀，静置，去除沉淀，得第二上清液；向第二上清液中加入等体积的饱和硫酸铵，搅拌均匀，静置，去除沉淀，得纯化的耐高温谷氨酰胺转胺酶酶液；

（6）葡聚糖凝胶浓缩：

向纯化的耐高温谷氨酰胺转胺酶酶液中加入质量浓度20%的G50干葡聚糖凝胶，搅拌均匀，使凝胶充分吸水膨胀，再过滤去除凝胶，重复多次，得耐高温谷氨酰胺转胺酶酶浓缩液；

（7）喷雾干燥：

将耐高温谷氨酰胺转胺酶酶浓缩液用干燥机进行低温干燥，整体干燥过程酶液和物料表面温度不高于60℃，得干燥的耐高温谷氨酰胺转胺酶，回收率≥75%，产品酶活≥120U/g。