[发明专利]独一味酚苷的提取方法及防治肝纤维化药物或保健品的应用

说明书

本发明属于医药及保健品领域，具体涉及酚苷混合物在制备防治肝纤维化药物或保健品中的应用，特别是独一味总酚苷提取物的酚苷混合物，本发明还涉及一种独一味总酚苷提取物的提取方法。本发明独一味总酚苷提取物中标志性成分为毛蕊花糖苷、连翘酯苷B、4‑羟基苯甲酸、淫羊藿苷H1、Decaffeoylverbascoside、大波斯菊苷、木犀草素和芹菜素这8种成分，它们具有抗肝纤维化的作用，可用来制备预防和治疗肝纤维化的药物，或辅助治疗CCl₄肝损伤的保健品。本发明独一味总酚苷提取物的提取方法采用聚丙烯酰胺凝胶树脂，使独一味总酚苷提取物的分离纯化更顺利、得率更高。

技术领域

本发明涉及中药及保健品领域，特别涉及酚苷混合物在制备防治肝纤维化药物或保健品中的应用，特别是独一味总酚苷提取物的酚苷混合物，也涉及一种独一味总酚苷提取物的提取方法。

背景技术

长期的乙肝病毒侵害、非/酒精性脂肪、或肝胆汁淤积对肝脏的损伤，引起肝组织修复能力失调，导致粘连蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和胶原-α1(Coll-α1)等细胞外基质过度沉积，最终形成肝纤维化。研究表明转化生长因子-β(transforming growthfactor-β，TGF-β)的过度活化是肝纤维化发生发展的主要因素之一(Meng X M,et al.TGF-β:the master regulator of fibrosis.[J].Nature Reviews Nephrology,2016,48:)；TGF-β信号通路的过度激活，促进细胞外基质(ECM)的过度沉积，进一步导致肝硬化或肝细胞癌的发生。此外，TGF-β信号通路还调节许多生物反应，包括细胞增殖、凋亡、分化、自噬和免疫反应等。因此，抑制TGF-β通路激活成为抗纤维化重要的靶点之一。

独一味为唇形科植物独一味Lamiophlomis rotata(Benth.)Kudo的干燥地上部分，也是《中国药典》收载治疗多种外科手术后的刀口创伤、出血等疾病的常用药，其相关口服制剂疗效确切，且安全性好。

2010-2013年，张怡课题组研究发现独一味颗粒具有较好的抗肝纤维化作用(杨晗,张怡,谭万初,等.独一味颗粒抗大鼠肝纤维化的实验研究[J].上海中医药杂志,2010,044:64-67；张怡,代夏欢,解秀翠,等.独一味颗粒对实验性肝纤维化大鼠TGF-β1/Smads信号通路的影响[J].中国中医基础医学杂志,2013,019(012):1401-1403,1407.)，但未见相关后继报道。

独一味颗粒以独一味药材的水提取物，浓缩干燥后，加适当的赋形剂组成，服用量大，药效物质不明确。迄今为止从独一味中已鉴定环烯醚萜、黄酮和苯乙醇苷等127个化学成分(Zhan-HuCui,et al.Traditional uses,phytochemistry,pharmacology andtoxicology of Lamiophlomis rotata(Benth.)Kudo:a review.RSC Advances.2020,10:11463–11474)，究竟哪一类或那些成分具有抗肝纤维化的作用，迄今为止，未见报道。

我们前期研究表明，独一味总环烯醚萜苷可明显促进机械损伤模型动物伤口胶原沉积，而独一味中的黄酮和苯乙醇苷类成分(合称酚苷)却未显示相关药理活性。本发明体外实验首次发现，不同浓度的独一味总酚苷提取物可人源抑制肝星状细胞(LX-2)增殖，促进TGF-β活化后LX-2细胞的凋亡，体内实验，独一味总酚苷提取物可显著减轻CCl₄小鼠肝组织炎症反应、肝纤维化程度，能够显著改善CCl₄小鼠肝损伤，减轻肝脏组织胶原沉积，抑制肝纤维化，同时降低模型动物血浆中ALT和AST。

独一味总酚苷提取物抗模型动物肝纤维化的机制，与其抑制TGF-β/Smad信号通路过度激活密切相关，该提取物可显著抑制CCl₄小鼠肝组织中Smad 2、3、4蛋白和mRNA水平的表达，升高Smad 7蛋白和mRNA水平的表达；进而减轻肝脏组织中FN、α-SMA和Coll-α1等细胞外基质的分泌，最终防治肝纤维化的发生发展。