[发明专利]一种用于治疗乳腺炎的中药膏剂的制备及应用方法在审
申请号: | 202111229024.0 | 申请日: | 2021-10-21 |
公开(公告)号: | CN113730486A | 公开(公告)日: | 2021-12-03 |
发明(设计)人: | 柳巨雄;刘松奇;付守鹏;郭文晋;胡桂秋;曹宇 | 申请(专利权)人: | 吉林大学 |
主分类号: | A61K36/86 | 分类号: | A61K36/86;A61K9/06;A61K47/06;A61K47/38;A61P15/14;A61P31/04;C12Q1/28;C12Q1/6883;G01N21/64;G01N33/68;A61K31/045;A61K36/288 |
代理公司: | 北京众泽信达知识产权代理事务所(普通合伙) 11701 | 代理人: | 周振 |
地址: | 130022 吉*** | 国省代码: | 吉林;22 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 治疗 乳腺炎 中药 膏剂 制备 应用 方法 | ||
1.一种用于治疗乳腺炎的中药膏剂,其特征在于,包括以下重量份数配比的原料:薄荷醇4g,紫花地丁50g,蒲公英50g,冰片2g。
2.根据权利要求1所述的一种用于治疗乳腺炎的中药膏剂,现提供一种用于治疗乳腺炎的中药膏剂的制备方法,其特征在于:第一步,准备干燥干净的原料药,并对每种原料药进行研磨粉碎;
第二步,取50g蒲公英干燥粉末和50g紫花地丁干燥粉末,加入1000ml的75%乙醇浸泡过夜,将浸泡过夜的混合物进行超声处理1h,然后过滤回收三次,最后合并滤液,将滤液加入到旋转蒸发器中,对滤液进行浓缩处理,使滤液浓度浓缩至1g/ml,随后加入羧甲基纤维素钠4g,制成胶体溶液;
第三步,量取20ml液体石蜡,将研磨完全的薄荷醇4g与冰片晶体2g溶于液体石蜡中得到混合物;
第四步,将第二步中得到的胶体溶液与第三步中得到的混合物加入到380g热溶解的凡士林中融合,搅拌均匀,冷却至室温后包装。
3.根据权利要求1所述的一种用于治疗乳腺炎的中药膏剂,现提供一种用于治疗乳腺炎的中药膏剂的应用方法,其特征在于:
S1、选取15只SPF级的品系为ICR的小鼠,小鼠的年龄为8-9周龄,对小鼠进行合笼,每笼两雌一雄,选择分娩后3-7天的小鼠,将小鼠随机分为3组,分别为空白对照组(对照组),乳腺炎模型组(乳腺炎组),乳腺炎模型+中药膏剂治疗组(治疗组),每组五只小鼠;
S2、试验前准备浓度为0.2mg/ml的LPS,使用无菌生理盐水溶解,随后通过腹腔注射戊巴比妥(45mg/kg)的方式进行麻醉并固定,通过乳内注射LPS的方式建立乳腺炎模型;
S3、在构建乳腺炎模型12h后,开始通过涂抹的方式给药,每天一次,共计给药三天;
S4、在给药完成后,进行乳腺组织的收集,取一部分新鲜的乳腺组织进行石蜡切片的制备,随后对石蜡切片进行HE染色,用于观察乳腺组织的病理损伤情况;
S5、取一部分乳腺组织进行炎性因子表达水平的检测,采用ELISA检测方式检测乳腺组织中炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平,以评估乳腺组织中炎症反应的严重程度;
S6、取一部分乳腺组织用于髓过氧化物酶(MPO)活性的检测,通过检测MPO活性水平高低反应中性粒细胞等白细胞在乳腺组织内的浸润情况,以评估乳腺组织炎症反应的严重程度;
S7、取一部分乳腺组织进行炎性因子mRNA表达水平的检测,采用荧光定量PCR检测炎性因子COX-2、INOS、IL-1β、IL-6和TNF-α在乳腺组织中的mRNA的表达水平,以评估乳腺组织中炎症反应的严重程度。
4.根据权利要求3所述的一种用于治疗乳腺炎的中药膏剂的应用方法,其特征在于:所述小鼠乳腺炎模型的建立方法为:首先通过腹腔注射戊巴比妥(45mg/kg)将小鼠麻醉后固定,其次,用75%酒精给小鼠第四对乳腺周围进行消毒,然后,用微量注射器向小鼠的第四对乳头中分别注射50μl的LPS(0.2mg/ml),最后,收集乳腺组并于-80℃冰箱保存。
5.根据权利要求3所述的一种用于治疗乳腺炎的中药膏剂的应用方法,其特征在于:所述石蜡切片的制作方法为:收集新鲜的乳腺组织,将其浸泡在4%的甲醛溶液中固定24h后,转移至70%的乙醇中保存,将组织在不同浓度的酒精中进行脱水处理,随后在二甲苯中进行透明处理,通过浸蜡、包埋和切片等步骤制作石蜡切片。
6.根据权利要求3所述的一种用于治疗乳腺炎的中药膏剂的应用方法,其特征在于:乳腺组织中炎性因子的检测方法为:取乳腺组织称重后置于2ml EP管中,按照每100mg的组织加入4000μl HEPES+STI的比例加入HEPES+STI溶液,在研磨仪中研磨10min,随后在4℃离心机中13000r/min离心30min,取上清液稀释10倍后,使用ELISA试剂盒进行IL-1β、IL-6和TNF-α炎性因子表达水平的检测。
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