[发明专利]检测多粘菌素耐药基因的数字PCR引物探针组合物、试剂盒及方法在审
| 申请号： | 202111231988.9 | 申请日： | 2021-10-22 |
| 公开（公告）号： | CN113817855A | 公开（公告）日： | 2021-12-21 |
| 发明（设计）人： | 许丽;杨镇州;杨雪;刘刚;李兰英;闻艳丽;梁文;陶晴 | 申请（专利权）人： | 上海市计量测试技术研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 王艳斋 |
| 地址： | 201203 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 多粘菌素 耐药 基因 数字 pcr 引物 探针 组合 试剂盒 方法 | ||
1.检测多粘菌素耐药基因的数字PCR引物探针组合物，其特征在于，所述数字PCR引物探针组合物包括分别检测MCR-6基因、MCR-7基因、MCR-8基因、MCR-9基因和MCR-10基因的引物对和探针；
其中，所述MCR-6基因的引物对包括SEQ ID No.1～2所示的核苷酸序列，所述MCR-6基因的探针包括SEQ ID No.3所示的核苷酸序列；
所述MCR-7基因的引物对包括SEQ ID No.4～5所示的核苷酸序列，所述MCR-7基因的探针包括SEQ ID No.6所示的核苷酸序列；
所述MCR-8基因的引物对包括SEQ ID No.7～8所示的核苷酸序列，所述MCR-8基因的探针包括SEQ ID No.9所示的核苷酸序列；
所述MCR-9基因的引物对包括SEQ ID No.10～11所示的核苷酸序列，所述MCR-9基因的探针包括SEQ ID No.12所示的核苷酸序列；
所述MCR-10基因的引物对包括SEQ ID No.13～14所示的核苷酸序列，所述MCR-10基因的探针包括SEQ ID No.15所示的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的数字PCR引物探针组合物，其特征在于，所述探针含有荧光基团和淬灭基团；
优选地，所述荧光基团包括FAM或HEX；
优选地，所述淬灭基团包括MGB或BHQ1。
3.一种检测多粘菌素耐药基因的数字PCR试剂盒，其特征在于，所述数字PCR试剂盒包括权利要求1或2所述的检测多粘菌素耐药基因的数字PCR引物探针组合物。
4.根据权利要求3所述的数字PCR试剂盒，其特征在于，所述数字PCR试剂盒还包括预混液和质控品；
优选地，所述预混液包括缓冲液、DNA聚合酶和dNTPs；
优选地，所述质控品包括阳性质控品，所述阳性质控品的终浓度为(1～5)×104拷贝数/μL；
优选地，所述数字PCR试剂盒还包括水。
5.一种权利要求3或4所述的检测多粘菌素耐药基因的数字PCR试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
合成引物对和探针，构建阳性质控品，再放入预混液，得到所述检测多粘菌素耐药基因的数字PCR试剂盒。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述阳性质控品的构建方法包括：
人工合成MCR-6基因、MCR-7基因、MCR-8基因、MCR-9基因和MCR-10基因，分别连接到克隆载体上，得到重组质粒，再对所得重组质粒进行检测，得到所述阳性质控品。
7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
(1)合成引物对和探针；
(2)构建阳性质控品：
人工合成MCR-6基因、MCR-7基因、MCR-8基因、MCR-9基因和MCR-10基因，分别连接到克隆载体上，得到重组质粒，再对所得重组质粒进行检测，得到所述阳性质控品；
(3)放入预混液；
(4)对精密度和检出限进行检测，得到所述检测多粘菌素耐药基因的数字PCR试剂盒。
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