[发明专利]水果酶源发酵制备茶黄素的方法

权利要求书

1.一种水果酶源发酵制备茶黄素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)以有效成分含量为80～98％的茶多酚配制为质量百分比为2-5％的茶多酚溶液作为发酵原液，将梨或苹果制成酶浆，过滤并在4℃下冷藏处理得到酶液，所得酶液的多酚氧化酶的酶活性为20～30U·ml^-1；

2)进行4次发酵：

a、第一次发酵：

物料配制：将1/4体积的所述发酵原液加入到发酵罐中，根据酶活性和茶多酚质量比为930～1000U/g添加酶液，按所加入发酵原液和酶液质量之和与乙酸乙酯体积比为1:1～2加入乙酸乙酯，进行发酵；

发酵操作：发酵温度30～45℃、通气泵的通气量0.1～0.3L/ml·h、搅拌反应20～30min，停止反应；

液相分离：将上层乙酸乙酯层分离，向下层水相中添加乙酸乙酯，乙酸乙酯与水相的体积比为0.5～1：1，搅拌萃取20min后分离上层乙酸乙酯层，合并乙酸乙酯层为第一次发酵的茶黄素溶液，下层为第一次发酵遗留水相备用；

b、第二次发酵：向第一次发酵后遗留的水相中补加乙酸乙酯和1/4体积的所述发酵原液后重复a步骤中的发酵操作和液相分离，得到第二水相和第二乙酸乙酯层；

c、第三次发酵：向第二水相中补加乙酸乙酯和1/4体积的所述发酵原液后重复a步骤中的发酵操作和液相分离，得到第三水相和第三乙酸乙酯层；

d、第四次发酵：向第三水相中补加乙酸乙酯和1/4体积的所述发酵原液后重复a步骤中的发酵操作和液相分离，得到第四水相和第四乙酸乙酯层；

第二～四次发酵时，添加乙酸乙酯的体积与各水相的体积比为1～2：1；萃取时乙酸乙酯和水相体积比0.5～1：1；

合并各次发酵的乙酸乙酯层得茶黄素溶液；

3)对所得茶黄素溶液在5000～8000Pa下减压浓缩5～8h得到茶黄素粗提物，并同时分离回收乙酸乙酯溶液，所述粗提物经过精滤提纯后得到茶黄素，所得茶黄素中茶黄素含量为82～86％，收率85～86％，得率57～69％。

2.根据权利要求1所述的水果酶源发酵制备茶黄素的方法，其特征在于，所述精滤提纯操作包括以下步骤：

a、采用大孔树脂柱AB-8、D101、XDA-8中的至少一种层析，得到洗脱液；

b、浓缩洗脱液、喷雾干燥操作得到茶黄素产品。

3.根据权利要求2所述的水果酶源发酵制备茶黄素的方法，其特征在于，所述精滤提纯操作采用大孔树脂柱AB-8或大孔树脂柱D101层析时洗脱液为80％乙醇溶液。

4.根据权利要求2所述的水果酶源发酵制备茶黄素的方法，其特征在于，所述精滤提纯操作采用大孔树脂柱XDA-8树脂柱层析时，洗脱液为75～80％乙醇溶液。

5.根据权利要求1所述的水果酶源发酵制备茶黄素的方法，其特征在于，所述喷雾干燥包括以下步骤：对洗脱液浓缩液进行喷雾干燥。

6.根据权利要求1所述的水果酶源发酵制备茶黄素的方法，其特征在于，所述喷雾干燥条件为进风口温度为160～180℃，出风口温度70-90℃。