[发明专利]一种基于磁微粒发光法的细胞因子检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于磁微粒发光法的细胞因子检测试剂盒，属于检测试剂技术领域，包括捕获微球混合液、检测抗体、SA‑PE、实验缓冲液、洗涤缓冲液和工作液，生产工艺按照制备微球的活化与包被、配制检测抗体、配制SA‑PE、配制实验缓冲液、配制洗涤缓冲液和工作液进行生产，解决了当检测一个样本中的IL‑1β、IL‑2、IL‑4、IL‑6、IL‑10、TNF‑α蛋白时，需要单独的用六种检测试剂分别对IL‑1β、IL‑2、IL‑4、IL‑6、IL‑10、TNF‑α蛋白进行检测的问题，缩短了检测时间，从而提高了检测效率。

技术领域

本发明涉及一种基于磁微粒发光法的细胞因子检测试剂盒，属于检测试剂技术领域，本发明是一种可以在一个微孔中，同时测定一个样本中的IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α六种细胞因子的检测试剂盒。

背景技术

IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α是人体中常见的细胞因子，然而随着医疗水平的进步，IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α都能通过现有的检测试剂进行检测，然后再做进一步的治疗，然而当检测一个样本中的IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α时，需要单独的用六种检测试剂分别对IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α进行检测，增加了检测时间，降低了检测效率。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于：提供一种基于磁微粒发光法的细胞因子检测试剂盒，它解决了当检测一个样本中的IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α时，需要单独的用六种检测试剂分别对IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α进行检测的问题。

本发明所要解决的技术问题采取以下技术方案来实现：

一种基于磁微粒发光法的细胞因子检测试剂盒，检测试剂盒包括捕获微球混合液、检测抗体、SA-PE、实验缓冲液、洗涤缓冲液和工作液，

(1)捕获微球混合液：悬浮液中包含有可辨识的聚苯乙烯微珠,聚苯乙烯微珠分别包被有如下抗体：抗人IL-1β抗体、抗人IL-2抗体、抗人IL-4抗体、抗人IL-6抗体、抗人IL-10抗体、抗人TNF-α抗体；

(2)检测抗体：原液浓度为0.5mg/mL的情况下用蛋白稳定液稀释62.5倍，使浓度为0.8μg/mL；

(3)SA-PE：原液浓度为1mg/mL的情况下用蛋白稳定液稀释50倍，使浓度为2μg/mL；

(4)工作液：原液浓度为40.6mg/mL的情况下用蛋白稳定液稀释6.7倍，使浓度为0.6mg/mL；

(5)实验缓冲液：在1000mL的磷酸缓冲液中加入50gBSA，1mLTween-20，3mLProclin300和0.5mL RPE2520，搅拌30min分钟以上，待溶液澄清无杂质后，进行至少0.45μm的除菌过滤；

(6)洗涤缓冲液：在1000mL的磷酸缓冲液中加入5mL Tween-20，3mL Proclin300和0.3mL RPE2520，搅拌30min分钟以上，待溶液澄清无杂质后，进行至少0.45μm的除菌过滤。

作为优选实例，试剂盒的生产工艺主要有以下几步：

①制备活化缓冲液，活化缓冲液主要成分包括：即8.0g/L的NaCl试剂，2.9g/L的Na2HPO4·12H2O试剂，2.4g/L的KCl试剂，2.4g/L的KH2PO4试剂，0.5g/L的Tris试剂，0.5mL/L的Tween20试剂，0.5g/L的SodiumAzide试剂。

②微球的活化与包被，取1mL特定编号微珠加入1.5mL离心管，加入5-50uLEDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)和5-50uLSuLfo-NHS(N-羟基硫代琥珀酰亚胺),加入10-100ug特定抗体，涡旋混匀30秒，超声混匀30秒，2-8℃摇匀过夜。