[发明专利]构建湖南主栽烟草品种烤后烟叶品种分子标记图谱的引物组及其应用

权利要求书

1.构建湖南主栽烟草品种烤后烟叶品种分子标记图谱的引物对，其特征在于，包括SEQID No.1-46所含的23对引物对中的一种或多种。

2.权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述的湖南主栽烟草品种为湘烟3号、湘烟5号、湘烟6号、湘烟7号、云烟87、云烟97、云烟99、云烟100、云烟203、中烟100原、中烟100、粤烟9、贵烟1号、红花大金元、龙江911、南江3号、NC729、G80或K326。

3.权利要求1所述的引物对在湖南主栽烟草品种烤后烟叶品种鉴定中的应用。

4.权利要求1所述的引物对在构建湖南主栽烟草品种烤后烟叶品种分子图谱中的应用。

5.如权利要求3或4所述的应用，其特征在于，所述的湖南主栽烟草品种为湘烟3号、湘烟5号、湘烟6号、湘烟7号、云烟87、云烟97、云烟99、云烟100、云烟203、中烟100原、中烟100、粤烟9、贵烟1号、红花大金元、龙江911、南江3号、NC729、G80或K326。

6.一种湖南主栽烟草品种烤后烟叶品种分子标记图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)、提取烤后烟叶的DNA；

(2)、以提取的DNA为模板，以权利要求的引物组为扩增引物，建立PCR反应体系并进行PCR扩增；

(3)将扩增产物进行电泳，根据电泳结果对每个品种的样品DNA的扩增结果形成引物字母编号加扩增条带位置数字的带型编号，即得。

7.如权利要求6所述的构建方法，其特征在于，采用CTAB法提取烤后烟叶的DNA；

PCR扩增体系(10μL)为2X M5 Taq PCR Mix 10μL、P1 0.3μL、P2 0.3μL、DNA 2μL(20ng/ul)、dd H₂O，7.2μL；扩增程序为：95℃，3min；95℃，30s；53℃，30s；72℃，30s，35个循环；72℃，10min。