[发明专利]一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法

说明书

一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法，包括如下步骤：步骤一：外植体选择；步骤二：外植体处理；步骤三：初代培养；步骤四：增殖培养；步骤五：生根培养：步骤六：炼苗移栽；步骤七：大田移栽。本发明解决了新品种茎叶不舒展、有效芽苗偏低的问题，利用本技术可使新品种快速繁殖，达到迅速推广的目的；本发明以新品种快繁，进行工厂化育苗为目的，步骤简单，生根率、炼苗成活率均达90％以上，移栽成活率达95％以上，种苗生长健壮。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说是一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法。

背景技术

国槐(Sophora japonica L.)，别名家槐、中国槐，属蝶形花亚科、槐属。在我国有着悠久的栽培历史，我国自周代起就在皇宫种植槐树，故槐树又有“宫槐”之称。其适应范围广，寿命长，抗污染能力强，且树姿优美，绿荫厚重，自古就被赋予了高贵、坚挺、豁达的精神寓意。国槐在日本越南也有分布，朝鲜并见有野生，欧洲、美洲各国均有引种，但国外有关国槐树种的研究报道几乎没有。国内目前关于国槐的研究主要集中在催芽、扦插、嫁接，组培，病虫害的防治方面，观赏品种(花色)除了聊红槐以外，尚未有别的研究报道。

山东省处于亚热带和暖温带的过渡地带，是国槐的适生地之一，存有大量的国槐古树。从古树中选择优良无性系，具有获得优良抗逆基因型的良好前景。山东省林业科学研究院自2011年开始，先后从山东、山西等省份收集国槐古树种质1403份。经过近10年的研究，共培育国槐新品种11个。其中，选育的‘姹紫1号’新品种花色艳丽，观赏性高，较普通国槐的花色上有了质的改变，符合国人的审美观点，同时，‘姹紫1号’既耐干旱瘠薄、又耐盐碱，满足当前市场的需求，适宜在我国北方地区推广应用。

新品种培育成功之后，能否快速大批量繁殖该树种的苗木将决定该树种的推广栽培速度。目前，良种繁育一般采用嫁接、扦插、组培等方法。扦插育苗和嫁接育苗繁殖系数低，穗条浪费严重。而新品种来源于古树、受古树生长状况影响，可采集接穗数量有限，且育成时间短，短期内很难大量快速繁殖。鉴于上述原因，新品种采用组织培养方式进行育苗。

国槐是多年生落叶乔木，种内变异较多，基因组庞大，许多性状特性复杂而不稳定，同一树种不同品种之间基因型不同。国内外研究报道，外植体离体培养受到基因型及激素的影响，在相同培养基上不同基因型生长状态存在差异。在20世纪70年代，山东省林业科学研究院就已经开始组培研究。自1999年以来，开展紫花苜蓿、国槐、黄金槐及四倍体刺槐基因工程育种工作，建立了上述植物的组培快繁体系及高频再生体系。然而，受基因型的限制，‘姹紫1号’在原有的培养基上生长较差，虽然诱导的芽数量多，但是有效芽数量少，芽小而不能伸长，丛生芽节间较短，叶片小而不展，茎叶生长速度缓慢，繁殖速度明显降低(见图11)。

关于国槐的组培研究报道较少，王帅对国槐下胚轴进行离体培养，分化率和增殖系数分别是50％、5.3，不定芽生根率最高为60％。张先云(国槐离体培养及高效再生体系的优化中国农学通报2010，26(11)：227-230)以国槐枝条为材料，探讨了不同激素组合对国槐无菌芽的产生、愈伤组织的形成、分化、增殖以及生根的影响，生根率最高70.2％，移栽成活率85.7％，且为从组培苗基部愈伤组织生根，愈伤组织上分化出不定根通常表现为不定根与茎连接较疏松，在移栽时易于脱落，不利于幼苗的移栽成活。袁秀云(国槐植株再生技术研究安徽农业科学2007,35(35):11418-11419)生根率只有60％，且接种数量只有10棵。刘桂民(国槐组织培养生根的研究山东林业科技2012(4)：42-44)研究发现，单独使用0.1mg/L的NAA时，生根率为100％，根直接从幼苗基部诱导出，且底部无愈伤组织形成，但诱导出的根颜色呈黑褐色，苗木生长弱；附加IAA0.4mg/L+NAA0.01mg/L的诱导效果最好，其生根率可达80％,平均生根数为2.3，研究止于生根阶段，后续的炼苗移栽未有提及。

在幼芽培养和不定根诱导过程中，外植体的选择及灭菌、培养条件和激素配比等方面不同实验室的结果之间有不同程度的差异，且这些仅限于实验室研究，作为新品种采取组织培养方式进行工厂化育苗体系来说是远远不够的。