[发明专利]一种猪伪狂犬病毒EP0蛋白的单克隆抗体、制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种猪伪狂犬病毒EP0蛋白的单克隆抗体、制备方法和应用，属于基因工程技术领域，其单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.11所示。本发明筛选获得了3株能够稳定分泌与EP0蛋白发生特异性反应的单克隆抗体的杂交瘤细胞株2C5、4C6和3B5。经单抗亚型鉴定，发现2C5为IgG2b/κ型，3B5和4C6均为IgG1/κ型。本发明所制备的针对RPV EP0蛋白的单克隆抗体能够为进一步分析EP0蛋白的功能提供研究基础。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种猪伪狂犬病毒EP0蛋白的单克隆抗体、制备方法和应用。

背景技术

猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)属于疱疹病毒科，α疱疹病毒亚科，猪疱疹病毒属。PRV可以感染多种家畜及野生动物，主要引起发热﹑奇痒(猪除外)以及脑脊髓炎等症状，危害极其严重，是OIE规定必须上报的疫病之一。母猪感染PRV后，能够引起母猪繁殖障碍，如怀孕母猪的流产、死胎、弱胎甚至木乃伊胎。仔猪感染PRV后，能够引起仔猪出现神经症状，2周龄内的仔猪会发病死亡，致死率高达100％。成年猪耐过后呈现潜伏感染的特点，这也是其难以防治的重要原因。PRV病毒粒子呈椭圆或圆形，直径110-150nm之间，主要由脂质间膜、间质层、核衣壳以及病毒基因组四部分组成。其基因组为线性双链DNA，长约150kb，可分为独特长片段(UL)、独特短片段(US)及短区段两侧的末端重复序列(TRS)和内部重复序列(IRS)。全长基因组可编码73个基因，根据转录时间顺序，可分为立早、早期、早/晚、晚期四类基因。EP0是PRV基因组编码的最主要的早期基因。迄今为止，EP0蛋白的功能尚未完全研究清楚，但PRV的EP0与HSV-1的ICP0同源，在结构和功能上应有相似之处，故推测EP0蛋白可能在PRV的潜伏感染和激活过程中起着重要作用。有研究表明EP0是病毒基因组转录和复制的一个转录激活因子，体外提取的EP0重组蛋白可在细胞核提取物中促进人工合成的TATA box的启动子转录的起始。此外，EP0蛋白还具有拮抗干扰素调节的抗病毒作用，有利于PRV在宿主体内建立潜伏感染。

为了深入研究EP0蛋白在病毒感染中发挥的作用，并实现对PRV病毒感染的准确诊断，开发EP0蛋白特异性单克隆抗体，对深入研究EP0蛋白生物学功能具有重要意义，也将有助于PRV诊断检测试剂的开发。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪伪狂犬病毒EP0蛋白的单克隆抗体、制备方法和应用，以解决上述现有技术存在的问题，本发明使用原核表达系统表达并纯化了EP0蛋白，免疫BALB/c小鼠，制备了特异性针对PRV EP0的单克隆抗体，并分析了单克隆抗体的特性，为更好地研究EP0蛋白功能提供了物质基础。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种猪伪狂犬病毒EP0蛋白的单克隆抗体，其包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.11所示。

进一步地，还包括前导序列和恒定区；所述重链前导序列的氨基酸序列如SEQ IDNo.4所示，所述重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No.6所示；所述轻链前导序列的氨基酸序列如SEQ ID No.10所示，所述轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No.12所示。

本发明还提供编码如上述的单克隆抗体的基因，编码所述单克隆抗体重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，编码所述单克隆抗体轻链可变区的核苷酸序列如SEQID No.8所示。

本发明还提供包含上述的基因的表达载体。

本发明还提供包含上述的表达载体的宿主细胞。

本发明还提供一种如上述的单克隆抗体的制备方法，包括培养上述的宿主细胞，表达抗猪伪狂犬病毒EP0蛋白的单克隆抗体的步骤。