[发明专利]一种壳聚糖、鱼精蛋白抗菌止血微球及其制备方法

说明书

本发明属于新型止血材料技术领域，具体包括一种壳聚糖、鱼精蛋白抗菌止血微球及其制备方法，通过静电LbL制备一层组装物和组装物，并通过用BCA试剂盒方法测定未组装进微球中的鱼精蛋白含量，可根据鱼精蛋白的标准曲线计算其包封率，最终可以确定不同组装条件下的鱼精蛋白的组装情况，进行微球的优化制备。通过抑菌实验和凝血实验鉴定二层组装微球的性能，确定其对革兰氏阴性菌大肠杆菌和革兰氏阳性菌枯草芽孢杆菌两类细菌均具有优异的抑菌性能，确定二层组装微球较组装材料鱼精蛋白和HACC具有显著的凝血性能。

技术领域

本发明属于新型止血材料技术领域，具体涉及一种壳聚糖、鱼精蛋白抗菌止血微球及其制备方法。

背景技术

意外事故、手术和自然灾害等导致的创伤处大量失血是现代人类死亡的主要原因之一。救治后期的感染是最主要的并发症。然而，目前国内外主要的止血方式除了利用传统止血器械和传统止血药物止血外，还有研究人员开发了新型止血材料。前者可能会造成组织坏死或引发血栓等问题，后者也可能有使机体细胞组织受损等不良反应。

鱼精蛋白作为一种碱性阳离子多肽，主要存在于鱼类等的成熟精巢组织中。它的分子量较小，在四千至一万道尔顿之间，形状似球形，一般由30个左右氨基酸组成，等电点在10-12之间，可溶于水和稀酸。鱼精蛋白具有抑菌活性，通过自身碱性氨基酸或肽链的特殊结构而与细菌细胞壁上的肽聚糖结合，从而阻止了细胞壁的合成，作用于细菌细胞膜，通过改变膜上质子动力而影响了某些氨基酸的吸收，并且通过本身含有的磷脂负电荷结合膜上某些活性分子去阻断生物合成的信号，最终扰乱细菌生命活动而致其死亡。因此，它常被作为抑菌材料广泛使用。鱼精蛋白还具有凝血活性，可激活纤维原蛋白受体和α颗粒的释放而直接介导血小板的聚集而增强凝血效果，可以与肝素特异性结合而起到特殊凝血作用。除此之外，鱼精蛋白还具有优异的生物相容性且无毒性，被广泛用于医药领域。

羧甲基淀粉钠(CMS)是以淀粉这一天然植物多糖为原料制备的，可以于冷水中溶解，形成阴离子型的高分子聚电解质醚。它的制备方法主要有干法和水媒法等，化学性质稳定；在医药、食品、纺织等众多工业中都重要地位。在医药工业中，它因良好生物相容性和可生物降解性而常被制成水凝胶或纳米颗粒而用于药物递送等。

甲壳素是广泛存在于壳动物类和节肢动物类的外壳中的一类天然高分子化合物，脱去葡萄糖上的N－乙酰基则成为现在被人们使用最多的一类重要衍生物壳聚糖。但是，壳聚糖难溶于水的这一缺陷使其应用受限；而羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖(HACC)是采用不同方法在壳聚糖上引入羟丙基三甲基氯化铵的一类壳聚糖季铵盐，因引入了亲水性很强的基团，期较前者易溶于水，具有更广泛的应用。

层层自组装技术(LbL)利用溶液中高分子化物基团间的相互作用力而在基体上自发缔合形成结构完整，性质稳定，具有特定功能的分子聚集体的一门技术；其具有组装条件温和以及组装分子等材料的选择范围广等特点；用于LbL的材料种类繁多，因此其应用领域广泛，近年来在医药方向尤为突出。在医药领域方面，其制备的微囊可控制周围分子的扩散而实现药物控释。

发明内容

发明目的

本发明的目的在于利用静电LbL制备鱼精蛋白/CMS/HACC抑菌凝血微球，以期得到具有多功能作用的凝血材料，弥补市场不足。

技术方案

(1)鱼精蛋白和组装载体材料的理化性质的研究

测定鱼精蛋白在不同pH下的zeta－电位和平均粒径以及测定CMS、HACC组装材料和一层组装微球在不同pH和浓度下的zeta－电位，确定较适合的组装条件范围；

(2)组装微球的制备及结构性能的研究