[发明专利]一种生产鸡马立克氏病毒株的方法及其应用

权利要求书

1.一种生产鸡马立克氏病毒株的方法，其特征在于，包括：将鸡胚成纤维细胞在36.5～39℃的条件下培养22～24小时；后接种工作毒株，继续在36.5～39℃的条件下培养至70％的细胞发生病变；

所述鸡胚成纤维细胞的细胞生长采用F10-199营养液，且密度为120～180万/ml。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述F10-199溶液包括：

HAM’S/F-10和199培养基。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，包括：

将鸡胚制成细胞悬液形式的鸡胚成纤维细胞；

将所述鸡胚成纤维细胞在36.5～39℃的条件下培养22～24小时；后接种工作毒株，继续在36.5～39℃的条件下培养至70％的细胞发生病变；

收集所有细胞，于2～8℃，2000～3000r/min离心10～20分钟，收集沉淀。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述工作毒株为血清Ⅰ型的马立克氏病病毒CVI988-Rispens株。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述培养为在细胞工厂中进行培养，所述工作毒株的接种量为1500～2000PFU/cm²；和/或，所述鸡胚成纤维细胞的密度为140～160万/mL。

6.一种马立克氏病疫苗，其特征在于，所述马立克氏病疫苗包括由权利要求1-5任一项所述方法制备得到的马立克氏病毒株。

7.根据权利要求6所述的马立克氏病疫苗，其特征在于，所述马立克氏病疫苗包括：权利要求1-5任一项所述方法制备得到的马立克氏病毒株、199营养液、新生牛血清和冷冻保护剂；

其中，199营养液、新生牛血清和冷冻保护剂的体积比为(70～90):(5～20):(5～20)。

8.根据权利要求7所述的马立克氏病疫苗，其特征在于，所述马立克氏病疫苗中所含病毒蚀斑数不低于3200PFU/羽份；和/或，所述冷冻保护剂为甘油、OriGen CD-50或二甲基亚砜中的一种或多种。

9.权利要求1-5任一项所述方法在提高马立克氏病毒株生产效率中的应用；所述马立克氏病毒株优选为马立克氏病病毒CVI988-Rispens株。

10.权利要求1-5任一项所述方法在提高马立克氏病毒株免疫原性中的应用；所述马立克氏病毒株优选为马立克氏病病毒CVI988-Rispens株。