[发明专利]一种以AKR1C1作为检测靶点的检测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开了一种以AKR1C1作为检测靶点的检测试剂盒及其使用方法，包括：用于检测AKR1C1表达的特异性引物对；特异性引物对包括：扩增引物1和/或扩增引物2；扩增引物1的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；扩增引物2的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明首次提供了一种以AKR1C1作为检测靶点的检测试剂盒，该试剂盒能够特异性检测AKR1C1基因的表达，在子宫内膜癌患者患病初期评估患者对孕激素是否耐药，进而可用于判断患者对孕激素治疗的适用性。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种以AKR1C1作为检测靶点的检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

子宫内膜癌是最常见的女性生殖系统肿瘤之一，其发生率呈逐年上升趋势，成为严重威胁女性健康的生殖道恶性肿瘤。有研究表明，子宫内膜癌的发生可能是子宫内膜长期受雌激素的刺激，而无孕激素的拮抗所致。目前子宫内膜癌的治疗方法有很多，如手术、放疗、化疗等。但随着子宫内膜癌发病率的提高及诊断水平的改进，许多年轻患者需要保守治疗，保留生育功能，孕激素作为保守治疗的手段之一取得了较佳的疗效。

孕激素(又称孕酮)耐药是阻碍子宫内膜癌患者生殖保育治疗的关键问题，导致患者孕激素耐药的一个主要原因是患者体内有较高水平的AKR1C1，AKR1C1可使孕酮代谢为无活性的20-α-羟孕酮，导致孕激素耐药。因此，检测子宫内膜癌患者AKR1C1的表达量，能有效起到孕激素耐药风险预警作用，从而制定出正确有效的治疗方案。但AKR1C家族因子之间，AKR1C1、AKR1C2、AKR1C3和AKR1C4具有很高的氨基酸同源性(84-98％)，编码区碱基之间的identity positions(一致位点)也高达83.7％。这些高度同源的家族因子给AKR1C1特异性引物的设计增加了难度，也为开发以AKR1C1作为检测靶点的检测试剂盒带来了困难。

发明内容

本发明的目的是提供一种以AKR1C1作为检测靶点的检测试剂盒，可以特异性检测AKR1C1的表达，预先评估患者对孕激素是否耐药，方便患者治疗方案的制定。

为了达到上述目的，本发明提供了一种以AKR1C1作为检测靶点的检测试剂盒，包括：用于检测AKR1C1表达的特异性引物对；所述特异性引物对包括：扩增引物1和/或扩增引物2；所述扩增引物1的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述扩增引物2的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

可选的，所述检测试剂盒还包括：用于检测GAPDH表达的扩增引物3。

可选的，所述扩增引物3的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

可选的，所述检测试剂盒还包括：逆转录RT-PCR反应液、荧光定量PCR反应液、和/或说明检测孕激素耐药的方法的使用说明书。

可选的，所述检测试剂盒用于检测孕激素耐药。

本发明还提供了上述检测试剂盒的使用方法，包括：

步骤S1，提取待检测样品的RNA；

步骤S2，将所述待检测样品的RNA反转录合成cDNA，采用扩增引物1和/或扩增引物2对AKR1C1 cDNA进行扩增；采用扩增引物3对GAPDH cDNA进行扩增；

步骤S3，计算待检测样品中AKR1C1的相对表达量。

可选的，所述待检测样品为外周血。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：