[发明专利]一种杀菌剂对小麦锈病防治效果的室内生测方法

权利要求书

1.一种杀菌剂对小麦锈病防治效果的室内生测方法，其特征在于，该方法为：

S1、育苗：

挑选粒大饱满的小麦种子，种植于花盆中，在光照和黑暗交替进行的温室条件下培养10天～12天，至小麦的第一叶完全展开时，选择壮苗留苗，得到供试小麦幼苗；

S2、小麦锈菌定量接种：

将小麦锈菌夏孢子加入至电子氟化液中，混合均匀配成浓度为2g/L的孢子悬浮液；将所述孢子悬浮液定量接种至S1中得到的供试小麦幼苗的第一片叶中间4cm叶段区间处，得到接种后的小麦幼苗；所述第一片叶中间4cm叶段提前做标记；

S3、培养基的配制：

将6-BA用浓度为1mol/L的NaOH溶液溶解后，加蒸馏水稀释得到6-BA的浓度为1000mg/L的母液a；

将杀菌剂原药加丙酮溶解后，用蒸馏水稀释制成杀菌剂有效成分浓度为100μg/mL的母液b；

将得到的所述母液a和不同质量的所述母液b加入至灭菌后的质量分数为0.5％的水琼脂溶液中，得到6-BA浓度为50μg/mL、杀菌剂有效成分浓度不同的培养基，命名为培养基a～培养基h，将所述培养基a～培养基h分别放在培养皿中，得到8个带药培养皿，对应各培养基依次命名为带药培养皿a～带药培养皿h，所述培养基a～培养基h中杀菌剂有效成分浓度依次为0μg/mL、0.03μg/mL、0.09μg/mL、0.27μg/mL、0.81μg/mL、2.43μg/mL、7.29μg/mL和21.87μg/mL；

S4、叶段剪取及培养：

将S2中接种后的小麦幼苗培养5天～6天，至小麦锈病花斑完全长出后，按照标记线将标记的叶段剪下，叶面朝上平行摆放在S3中得到的8个带药培养皿中，每皿贴5片叶段，得到8组叶片，并用透明塑料胶片压住叶段两头，使叶段与培养基充分接触，进行离体培养，将放有叶段的各带药培养皿在在光照和黑暗交替进行的培养箱中培养6天～7天，至作为对照组的带药培养皿a中的叶段充分发病时止，得到8组待拍照叶段；

S5、将S4中得到的8组待拍照叶段进行拍照，用Photoshop CS6软件分别测定所述待拍照叶段和夏孢子的像素值，计算发病面积的比例，然后用DPS 7.05软件计算毒力回归方程，得到待测菌株的EC₅₀值，用所述EC₅₀值将所述待测菌株对杀菌剂的抗性分类。

2.根据权利要求1所述的一种杀菌剂对小麦锈病防治效果的室内生测方法，其特征在于，S1中所述温室条件为：在温度为16℃的光照条件下培养17h，然后在温度为13℃的黑暗条件下培养7h，光照和黑暗交替进行。

3.根据权利要求1所述的一种杀菌剂对小麦锈病防治效果的室内生测方法，其特征在于，S2中所述小麦锈菌为小麦条形柄锈菌Puccinia striiformis f.sp.tritici或者小麦叶锈菌Puccinia recondita f.sp.tritici。

4.根据权利要求1所述的一种杀菌剂对小麦锈病防治效果的室内生测方法，其特征在于，S2中所述孢子悬浮液在每片叶片上的接种量为2.5μL。

5.根据权利要求1所述的一种杀菌剂对小麦锈病防治效果的室内生测方法，其特征在于，S3中所述杀菌剂原药为质量分数为97.5％的三唑酮原药。

6.根据权利要求1所述的一种杀菌剂对小麦锈病防治效果的室内生测方法，其特征在于，S4所述培养箱中培养的条件为：在温度为16℃的光照条件下培养17h，然后在温度为13℃的黑暗条件下培养7h，光照和黑暗交替进行。

7.根据权利要求1所述的一种杀菌剂对小麦锈病防治效果的室内生测方法，其特征在于，S5中所述EC₅₀值将所述待测菌株对杀菌剂的抗性分类为：

当0μg/mL≤EC₅₀＜0.75μg/mL时，0≤抗性系数RI＜5倍，为锈菌对杀菌剂敏感菌株；

当0.75μg/mL≤EC₅₀＜1.50μg/mL时，5倍≤抗性系数RI＜10倍，为锈菌对杀菌剂低抗菌株；

当1.50μg/mL≤EC₅₀＜6.00μg/mL时，10倍≤抗性系数RI＜40倍，为锈菌对杀菌剂中抗菌株；

当EC₅₀≥6.00μg/mL时，抗性系数RI≥40倍，为锈菌对杀菌剂高抗菌株。