[发明专利]玉米C型不育胞质恢复基因Rf12及其紧密连锁标记的应用

说明书

本发明公开了玉米C型不育胞质恢复基因Rf12及其紧密连锁标记的应用，属于基因工程技术领域。所述紧密连锁标记包括1对引物对：F：5’‑agtgcctgtgcttgcccattca‑3’；R：5’‑tcagatagctacctttgcttgcgc‑3’。所述Rf12在染色体上的位置为：B73_RefGen_v4Chr2:234057663‑234457207。本发明中的恢复基因Rf12可恢复大部分的玉米C型不育系；本发明中的显性标记SNP^‑55可对玉米C型不育胞质在2号染色体长臂的强恢复基因Rf12进行辅助选择，加快Rf12的回交转育进程，促进玉米C型不育胞质恢复基因的应用。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种玉米C型不育胞质恢复基因Rf12及其紧密连锁标记的应用，更具体地涉及一种玉米C型细胞质雄性不育在2号染色体长臂的育性恢复基因Rf12及其紧密连锁标记SNP^-55的应用。

背景技术

玉米作为集“粮、经、饲”于一体的多元作物，在我国国民经济发展中占据重要地位。玉米是较早开展杂种优势利用的作物。玉米杂种优势的成功利用得益于雌雄同株异花，人工去雄简单易行。目前，我国玉米杂交种子的生产仍主要依靠人工去雄。由于人工去雄的不及时、不彻底而导致的种子纯度降低，时有发生，直接影响到杂种优势的利用效率。利用雄性不育植株做母本进行杂交制种无需通过人工去雄，因而不仅可降低种子生产成本，同时可以保证杂交种子的纯度，是提高制种质量的有效途径。不育系、保持系和恢复系“三系”配套是细胞质雄性不育(CMS)应用于生产的前提。玉米C型细胞质雄性不育(CMS-C)育性稳定，利用玉米C型细胞质雄性不育系配制杂交种，在杂交制种上具有重要的应用潜力。

恢复基因可以在基因水平、转录水平、蛋白水平和代谢水平恢复细胞质雄性不育。恢复系是细胞质雄性不育不育化制种的基础，强恢复基因是恢复系创制和改良的前提，玉米C型不育胞质强恢复基因目前已经报道的有Rf4、Rf5，Rf4位于8号染色体短臂末端，Rf5位于5号染色体长臂，其中Rf5存在抑制基因RfI，限制了其在玉米C型不育胞质不育化制种中的应用，因此，新的强恢复基因的发现对于玉米C型不育胞质不育化制种及培育具有广泛恢复力的玉米C型不育胞质强恢复系具有重要意义。

分子标记辅助选择(Marker-assisted selection，MAS)是指利用分子标记对目的基因或性状进行选择。分子标记辅助选择可以直接对性状的基因型进行选择，筛选目标单株，提高育种效率，缩短育种进程。分子标记辅助选择在细胞质雄性不育恢复位点的鉴定、回交转育中具有广泛的利用，是玉米C型不育胞质恢复位点的选择及不育化制种的重要工具。

发明内容

本发明的目的是提供一种玉米C型不育胞质恢复基因Rf12及其紧密连锁标记的应用，以解决上述现有技术存在的问题，该标记与玉米育性紧密连锁，可鉴定玉米是否含有性别决定基因；对玉米植株的育性鉴定、筛选目标单株、玉米恢复基因的回交转育和恢复系品种的改良及克隆性分化基因各方面都具有重要的应用价值。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种玉米C型不育胞质恢复基因Rf12的紧密连锁标记SNP^-55，包括1对引物对：

F(SEQ ID NO：1)：5’-agtgcctgtgcttgcccattca-3’；

R(SEQ ID NO：2)：5’-tcagatagctacctttgcttgcgc-3’。

优选的是，利用所述的引物对扩增的目的基因片段的核苷酸序列为：Zm00001d007546基因起始密码子ATG上游76bp至ATG下游380bp共456bp的基因组序列，如SEQ ID NO：3所示：其中，所述Zm00001d007546基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

SEQ ID NO：3：