[发明专利]一种牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂及其应用

说明书

本发明提供了一种牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂及其应用，其调节剂中含有促肾上腺皮质激素(ACTH)。本发明通过采用添加有促肾上腺皮质激素的体外培养液对牛卵泡颗粒细胞培养时，促肾上腺皮质激素能够促进牛卵泡颗粒细胞孕酮的合成，促肾上腺皮质激素能够下调P450arom基因的表达，上调P450scc基因的表达，但对StAR基因和3β‑HSD基因表达无影响。促肾上腺皮质激素作为牛卵巢功能的内分泌调控因子，通过上调类固醇激素的合成，促进颗粒细胞分化。将促肾上腺皮质激素应用在牛卵泡颗粒细胞的增强类固醇合成的制剂中，具有良好的应用价值。

技术领域

本发明属于家畜配子胚胎工程技术领域，具体涉及一种牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂及其应用。

背景技术

卵泡颗粒细胞是卵泡中最重要的体细胞，对卵泡局部微环境调节有重要作用。早期颗粒细胞是由卵泡上皮细胞分化而来。颗粒细胞作为重要的类固醇激素合成细胞，可以促进卵巢合成与分泌雌激素和孕激素等多种激素及生长因子，通过缝隙连接调控卵泡膜细胞和卵母细胞的生长、分化和成熟，进而调控卵泡发育、成熟、排卵以及卵泡闭锁等过程。

奶牛在各种应激状态下，能通过激活下丘脑-垂体-肾上腺轴，引起肾上腺皮质激素分泌(Dobson等，2000)。皮质激素降低LH分泌的脉冲频率，最终使排卵前LH峰无法出现，从而导致排卵失败，诱发卵巢囊肿(Dobson等，2006；Ribadu等，2000；Colitti等，2007；Paredes等，2011)。卵巢囊肿是引起奶牛不孕症最常见的原因之一，其严重影响着奶牛的繁殖效率，制约着奶牛场的发展和养殖业的经济效益。据国外研究报道表明，卵巢囊肿的发病率为6.7％～13.1％(Wiltbank等，2002)。卵巢囊肿能够降低受胎率，延长产犊间隔，增加配种次数及淘汰率，从而影响奶牛的繁殖力，最终降低奶牛场的经济效益，给奶牛业造成严重的经济损失。

外源促肾上腺皮质激素(ACTH)可诱导奶牛发生卵泡囊肿，其主要通过激活下丘脑-垂体-肾上腺轴，改变LH分泌的脉冲频率，使排卵前LH峰无法出现而不能排卵，继而形成卵巢囊肿，其机理与应激导致卵巢囊肿一致(Amweg等，2013；Biran等，2015；Velazquez等，2013)。而奶牛卵泡囊肿形成的影响因素较多，其行成是一个涉及多组织、激素及信号通路调控的及其复杂的生物学过程，以前的研究多从卵泡囊肿奶牛血清、卵泡液激素变化及受体基因表达变化展开，虽取得了一些进展，但因生产实践中，当明确为卵泡囊肿时，所进行研究表现出的激素及基因表达变化，在时间上不能完全说明卵泡无法正常排卵时的机体异常变化状态，加上卵泡囊肿形成的不可预知性，造成研究者解析其形成的分子机制有一定困难性。目前，没有有关促肾上腺皮质激素对牛卵泡颗粒细胞影响的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂，用于促进牛卵泡颗粒细胞体外培养合成孕酮。

本发明的目的还在于提供促肾上腺皮质激素的一种新的用途，具体为促肾上腺皮质激素用于促进牛卵泡颗粒细胞孕酮的合成中的应用。

为实现上述目的，本发明采用以下的技术方案为：

一种牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂，用于促进牛卵泡颗粒细胞体外培养合成孕酮，其包括含有浓度为10^-10～10^-6mol/L的促肾上腺皮质激素的基础培养液。

如上所述的牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂，优选地，所述基础培养液为DMEM和Ham’s F-12按体积比为1:1的混合液。

如上所述的牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂，所述基础培养液还包括有按体积比的10％的胎牛血清，浓度为100U/mL的青霉素和浓度为0.1mg/ml的链霉素。

如上所述的牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂，优选地，促肾上腺皮质激素的浓度为10^-7mol/L。