[发明专利]一种与猪有腔卵泡闭锁相关的circRNA、其siRNA抑制剂及其应用

说明书

本发明属于家畜分子生物学技术领域，具体涉及一种与猪有腔卵泡闭锁相关的circRNA、其siRNA抑制剂及其应用；所述circRNA为circSLC41A1，其线性核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；本发明针对circSLC41A1设计特异性扩增引物，经PCR扩增、RNase R酶消化及荧光原位杂交验证所述的circSLC41A1的真实存在；利用荧光定量PCR检测到circSLC41A1在猪卵巢中健康有腔卵泡组织中表达高于闭锁卵泡，用siRNA干扰技术证实circSLC41A1对颗粒细胞凋亡具有显著抑制作用；同时，本发明设计并提供一种可作为circSLC41A1抑制剂的小RNA；本发明公开的circSLC41A1有望作为母猪繁殖相关的分子标志物，为猪繁殖性状的评价，繁殖力提升，为人类卵泡异常相关疾病的发生和预防提供新的理论基础和潜在的分子标靶。

技术领域

本发明属于家畜分子生物学技术领域，具体涉及一种与猪有腔卵泡闭锁相关的circRNA、其siRNA抑制剂及其应用。

背景技术

雌性动物的生殖性能，尤其是产仔数与其排卵数量紧密相关。卵泡闭锁是哺乳动物卵泡发育过程中的一种自然生理现象。在母猪出生前后，其原始卵泡腔形成，其卵泡储备含有大约500万个原始卵泡。然而在生长发育及发情周期过程中，大量卵泡在直径达到6毫米之前发生闭锁和消失，导致最终可实现的排卵率低于14％。作为卵泡的主要组成部分，颗粒细胞通过与卵母细胞和卵泡膜细胞密切相互作用并产生旁分泌物质而发挥功能。研究表明，颗粒细胞增殖和功能在卵泡发育和成熟中至关重要，而颗粒细胞凋亡率随着卵泡闭锁的进展而显著增加，因此颗粒细胞凋亡水平是卵泡闭锁的主要标志之一。

环状RNA(circRNA)是由前体mRNA通过前体RNA的反向剪接产生的一种新型非编码RNA，是由线性RNA3’端与5’端共价连接形成的闭合环状分子，其分布广泛、保守性高、结构稳定不被RNaseR剪切降解。今年来，在高通量测序技术的支持下，circRNA的广泛分布在多种动、植物细胞和组织中被证实。它们位于细胞核或细胞质中，通过转录(如与RNA结合蛋白相互作用)或转录后途径(如吸附miRNA)调节基因表达。越来越多的研究指出，circRNA在细胞分化、发育和功能障碍中具有重要作用。目前circRNA在母猪繁殖尤其是卵泡闭锁机制方面研究还较少，因此寻找影响母猪繁殖性能的circRNAs成为当前母猪繁殖与遗传育种研究及卵巢功能研究的新方向。

发明内容

为了达到上述目的，本发明提供一种与猪有腔卵泡闭锁相关的circRNA，所述的circRNA为circSLC41A1，circSLC41A1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明提供一种用于检测样品中circSLC41A1表达水平的试剂，所述circSLC41A1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述试剂含有特异性扩增circSLC41A1的引物对或特异性标记circSLC41A1的荧光原位杂交探针。

优选地，所述引物对的序列如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3。

优选地，所述探针的序列如SEQ ID NO:4所示。

本发明提供一种circSLC41A1抑制剂siRNA，所述siRNA序列如SEQ ID NO:5和SEQID NO:6所示。

本发明提供上述circRNA在动物细胞和组织表达量检测中的应用。

本发明提供上述circRNA在母猪的选择评定、配种以及遗传改良中的应用。

本发明提供上述试剂在动物细胞和组织表达量检测中的应用。

本发明提供上述试剂在母猪的选择评定、配种以及遗传改良中的应用。

可以有效检测circRNA在动物细胞或组织中相对表达量，即以circRNA特异引物进行实时定量PCR的方法进行检测；circRNA在猪健康有腔卵泡中的表达量极显著高于闭锁卵泡。