[发明专利]抗Actin蛋白单克隆抗体、细胞系及其应用

说明书

本发明涉及生物检测领域，提供了一种抗Actin蛋白单克隆抗体,其重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。发明人还提供了一株分泌抗Actin蛋白的杂交瘤细胞系，所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系3G8C7A6，保藏号为：CGMCCNO.22312。抗Actin蛋白单克隆抗体,具有高特异性、敏感性，可以特异性识别人Actin蛋白，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别涉及抗Actin蛋白单克隆抗体、细胞系及其应用。

背景技术

肌动蛋白(Actin)是一类形成微丝的球状多功能蛋白质。肌动蛋白在真核生物中广泛存在,在肌细胞中和非肌细胞的细胞质及细胞核内均有发现,是构成肌小节和细胞骨架的主要成分。其功能除了参与维持细胞的正常形态外，还参与调控细胞的应力纤维形成、黏附、迁移、凋亡、物质运输、跨膜信息传递以及受体聚集等。

肌动蛋白可以以球状的游离单体存在，称为G-肌动蛋白，或以丝状的线性聚合物微丝的一部分存在，称为F-肌动蛋白丝，这两者对于细胞的移动和收缩等重要的细胞功能是必不可少的。G一actin，由375个氨基酸残基所组成,分子量为42kD。目前已报道了动物有3种肌动蛋白异构体：α肌动蛋白(横纹肌型、心肌型、血管平滑肌型)，存在于收缩结构中；β肌动蛋白(细胞质型)发现于细胞的扩展边缘，使用其细胞结构的投射作为其移动手段、γ肌动蛋白(细胞质型、肠平滑肌型)存在于应力纤维的细丝中。肌动蛋白具有细胞分裂,染色体运动,细胞器的运动,细胞活化,细胞质流等所涉及的真核细胞的几乎所有的生理过程的重要的生理功能。肌动蛋白十分保守,各种生物体之间的氨基酸序列的同一性(Identity)高达70％以上甚至到100％。F一actin，是所有真核细胞运动的基础，肌动蛋白丝的基本结构曾用X一射线衍射和电子显微镜进行研究,表明肌动蛋白丝呈右手双股螺旋,重复螺距为72nm；其肌动蛋白单体呈左手螺旋排列，每轮含13个单体。

Actin抗体能特异性识别骨骼肌和心肌的α肌动蛋白。而与平滑肌的肌动蛋白无交叉反应。主要用于检测平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、肌上皮瘤等。还能识别肉芽组织、癫痕组织、结节性筋膜炎和纤维瘤中的肌纤维母细胞。另外Actin不仅在乳腺浸润性导管癌不同分子亚型中的表达存在差异,并且与肿瘤大小及淋巴结转移有关，检测Actin在乳腺浸润性导管癌中的表达,有助于为乳腺癌不同分子亚型的鉴别诊断及个体化靶向治疗(特别是TNBC型)提供新的研究方向。Actin在乳腺癌与正常乳腺及癌旁组织中的差异表达有利于乳腺良、恶性病变的鉴别诊断。

发明内容

发明人提供了一种抗Actin蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体重链和轻链可变区氨基酸序列分别是SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列所编码。

进一步地，所述单克隆抗体制备过程中，免疫小鼠所用的抗原为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列编码，经由大肠杆菌重组表达的重组蛋白。

进一步地，所述单克隆抗体特异性识别人Actin蛋白。

进一步地，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCCNO.22312的杂交瘤细胞系产生。所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞系3G8C7A6，分类命名为：小鼠杂交瘤细胞系，该细胞系已于2021年04月29日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

进一步地，所述抗Actin蛋白为小鼠IgG2b亚型单克隆抗体。

发明人还提供了一种抗Actin蛋白单克隆抗体的制备方法，其免疫小鼠所用的抗原为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列编码，经由大肠杆菌重组表达的重组蛋白。