[发明专利]一种单核细胞负载GPC3蛋白抗原的肿瘤疫苗组合物及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种单核细胞负载GPC3蛋白抗原的肿瘤疫苗组合物及其制备方法与应用，所述肿瘤疫苗组合物由抗原溶液及单核细胞组成，所述肿瘤疫苗组合物通过下述方法制备：制备抗原溶液，由外周血或骨髓分离获得单核细胞，将获得的抗原溶液与获得的单核细胞混合，制成肿瘤疫苗组合物。本发明的单核细胞负载GPC3蛋白抗原的肿瘤疫苗组合物及其制备方法与应用通过简化的单核细胞分离操作减少常规单核细胞分离及分化产生DC的操作步骤，极大程度地降低了疫苗制备成本；直接利用分离的单核细胞负载GPC3蛋白抗原，达到显著的抗击肿瘤效果，为更广泛的临床试验提供了前期技术基础。

技术领域

本发明涉及免疫治疗技术领域，具体来说，涉及一种单核细胞负载GPC3蛋白抗原的肿瘤疫苗组合物及其制备方法与应用。

背景技术

肝细胞癌(HCC)是世界上第二大恶性肿瘤，是癌症死亡的主要原因。中国肝癌发病率和死亡人数占全国总量的50％以上，世界范围内，肝癌死亡率居第三位。虽然HCC治疗方案倾向于多元化、组合化，但目前仍难以实现进一步提高患者的长期存活率。肿瘤疫苗是一种包含肿瘤抗原的基因或肿瘤的抗原肽。肿瘤疫苗可以诱导机体特异性细胞免疫及其体液免疫，进而攻击肿瘤细胞，实现预防肿瘤生长、转移和复发，因此可以作为肝癌治疗手段。

肝癌疫苗的开发依赖于肝癌细胞的特异性抗原，而GPC3是一个理想的靶点。GPC3在大多数肝癌细胞表面特异表达，但在成人的其他组织中几乎不表达。GPC3属于硫酸乙酰肝素蛋白多糖家族，其结构包括一个60-70kD的核心蛋白与位于细胞膜表面的由糖基磷、phatidylinositol锚(GPI)和用硫酸乙酰肝素侧链修饰的羧基末端。GPC3是非常合适的肝癌潜在治疗靶点，目前已有多种GPC3相关的疫苗(如GPC3表位短肽、GPC3蛋白)被开发出来，但其效果不甚理想。其原因可能是机体的抗原提呈效率过低。

发明内容

针对相关技术中的上述技术问题，本发明提出一种单核细胞负载GPC3蛋白抗原的肿瘤疫苗组合物及其制备方法与应用，能够克服现有技术的上述不足。

为实现上述技术目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种单核细胞负载GPC3蛋白抗原的肿瘤疫苗组合物，所述肿瘤疫苗组合物由抗原溶液及单核细胞组成，所述肿瘤疫苗组合物通过下述方法制备：

S1制备抗原溶液；

S2由外周血或骨髓分离获得单核细胞；

S3将S1获得的抗原溶液与S2获得的单核细胞混合，制成肿瘤疫苗组合物。

优选地，所述抗原溶液是诱导机体Th1免疫应答的特征性物质的溶液。

优选地，所述特征性物质为GPC3蛋白。

根据本发明的另一方面，提供了一种单核细胞负载GPC3蛋白抗原的肿瘤疫苗组合物的制备方法，该方法包括以下步骤：

S1制备抗原溶液；

S2由外周血或骨髓分离获得单核细胞；

S3将S1获得的抗原溶液与S2获得的单核细胞混合，制成肿瘤疫苗组合物。

优选地，S1中所述抗原溶液是由GPC3蛋白与PBS配制的GPC3蛋白溶液，所述GPC3蛋白溶液的浓度为1mg/mL。

优选地，所述单核细胞取自外周血或骨髓。

优选地，所述单核细胞采用淋巴分离液Ficoll密度梯度离心法制备。

本发明还提供了所述肿瘤疫苗组合物在制备用于治疗肝癌制品中的应用。

优选地，所述肿瘤疫苗组合物采用静脉注射的方式。