[发明专利]来源于人的先天性巨大黑痣良性肿瘤细胞系及其构建方法

说明书

本申请公开了一种来源于人的先天性巨大黑痣良性肿瘤细胞系及其构建方法，来源于人的先天性巨大黑痣良性肿瘤细胞系的保藏编号为CCTCC NO：C2021213，构建方法包括：向原代分离的先天性巨大黑痣细胞转染SV40LT抗原基因，筛选阳性克隆并传代培养以获得永生化的先天性巨大黑痣良性肿瘤细胞系。本申请克服了目前无法长期体外培养人先天性巨大黑痣细胞的缺陷，可获得与原代先天性巨大黑痣形态和特性无明显差别的永生化细胞系，为先天性巨大黑痣的发病分子机制、靶向药物筛选研究提供便利条件。

技术领域

本申请涉及肿瘤细胞系构建技术领域，具体涉及一种来源于人的先天性巨大黑痣良性肿瘤细胞系及其构建方法。

背景技术

黑色素细胞是人类皮肤组织中的一类重要细胞，主要存在于表皮基底层中，大约占基底层细胞的5％-10％。正常皮肤黑色素细胞合成并分泌黑色素为角质细胞所摄取，从而保护皮肤细胞免受紫外线的伤害。当皮肤黑色素细胞异常增殖聚集时，形成的病灶称为黑色素细胞痣。先天性黑色素细胞痣(congenital melanocytic nevi,CMN)是指出生时即有或出生后几周内出现的黑痣，相关研究报道其在新生儿中的发病率约为1％-6％，当CMN累及成年患者体表长径＞20cm时称为先天性巨大黑色素细胞痣(giant congenitalmelanocytic nevi,GCMN)，其发病率约为1/20000。GCMN往往严重影响患者容貌，导致患者严重的自卑心理，此外，GCMN的终身恶变几率可高达5％-15％。同时，约3％-12％的GCMN患者同时伴有痣细胞累及中枢神经系统，称为神经皮肤黑变病(neurocutaneous melanosis,NCM),该病目前无有效的治疗手段，一旦出现神经系统症状，患者往往3年内死亡。

GCMN病理生理改变主要表现为真皮层内大量痣细胞增殖聚集，目前对于其形成机制仍未完全明确，大量研究认为其与NRAS基因的体细胞突变有关。以往对于先天性巨痣等这一类涉及体表大部皮肤的良性肿瘤的治疗手段极其有限，手术切除几乎是唯一途径。近几年靶向治疗领域的研究进展给这类良性肿瘤的治疗带来新曙光。然而，GCMN为良性肿瘤，在体外研究中，其肿瘤细胞很难长期培养。目前国际上尚无永生化的先天性巨大黑痣良性细胞系，给GCMN的发病分子机制、治疗靶点探究、靶向药物开发带来极大限制。

发明内容

本申请提供一种来源于人的先天性巨大黑痣良性肿瘤细胞系及其构建方法，可以获得与原代先天性巨大黑痣形态和特性无明显差别的永生化良性肿瘤细胞系。

本申请提供一种来源于人的先天性巨大黑痣良性肿瘤细胞系，命名为GNC-9H-01，保藏中心保藏编号为CCTCC NO：C2021213。保藏单位名称为：中国典型培养物保藏中心(武汉大学保藏中心)，保藏单位代码为CCTCC-中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址为中国武汉武汉大学，保藏时间为2021年08月04日。

本申请的来源于人的先天性巨大黑痣良性肿瘤细胞系的标本来源为女性的手臂先天性巨大黑痣组织。

相应的，本申请还提供一种来源于人的先天性巨大黑痣良性肿瘤细胞系的构建方法，包括：向原代分离的先天性巨大黑痣细胞转染SV40LT抗原基因，筛选阳性克隆并传代培养以获得永生化的先天性巨大黑痣良性肿瘤细胞系。

可选地，在本申请的一些实施例中，构建方法包括：

步骤S1：提取原代先天性巨大黑痣细胞，对原代先天性巨大黑痣细胞进行培养以得到待转染细胞培养物；

步骤S2：以慢病毒对待转染细胞培养物进行病毒感染；

步骤S3：对经病毒感染后的细胞培养物进行阳性克隆筛选；

步骤S4：对经阳性克隆筛选后的细胞培养物进行传代培养，以得到永生化的先天性巨大黑痣良性肿瘤细胞系。

可选地，在本申请的一些实施例中，步骤S1～步骤S4使用MelM培养液，MelM培养液含有黑色素细胞生长因子，胎牛血清，其中还含有青霉素，链霉素。