[发明专利]抗PRL蛋白单克隆抗体、细胞系及其应用

说明书

本发明涉及生物检测领域，提供了一种抗PRL蛋白单克隆抗体,其重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。发明人还提供了一株分泌抗PRL蛋白的杂交瘤细胞系，所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系2C10D5H11，保藏号为：CGMCC NO.22311。抗PRL蛋白单克隆抗体,具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达PRL蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别涉及抗PRL蛋白单克隆抗体、细胞系及其应用。

背景技术

催乳素(Prolactin，简称PRL，又叫促乳素或催乳激素)，是垂体前叶嗜酸性细胞和胎盘分泌的一种蛋白激素，也是繁殖成功所必须的垂体前叶肽类激素。PRL是由单基因编码的多肽类激素，其化学结构与生长激素十分相似，均属于造血因子家族。人促乳素cDNA长度为914个核苷酸，其中含681个核苷酸的开放阅读框，编码227个氨基酸的促乳素前体，其中28个氨基酸信号肽，成熟的人促乳素由199个氨基酸组成。其化学结构和分子量在各种动物有所不同，促乳素多肽链中6个半胱氨酸形成了3个分子内二硫键，并在氨基末端形成一个特有的二硫环。PRL中有4个保守区是其主要功能结构域。PRL的二级结构研究表明它含有50％的α螺旋，形成4个反平行的螺旋结构，与相应受体结合的胞外域也高度保守。每个螺旋含25～32个残基，在第l、2及3、4螺旋间有延伸片段，形成拓扑结构。不同动物的PRL成熟蛋白分子均存在2个氨基酸数目一致并且比较保守的活性区域，分别位于57～90位和175～192位，其氨基酸的组成和序列存在一些差别。

PRL功能很多，但在哺乳动物中，最重要的功能仍然是促乳和与生殖有关的作用。PRL在血液循环中存在3种分子形式，它们是分子量约23kDa的小分子PRL(SPRL)，为单体非糖基化的激素，具有高生物学活性和免疫反应性，是PRL的主要组成形式；分子量为40—60kDa的大分子P1LL(BPRL)，是由糖基化PRL的二聚体组成；分子量在100kDa以上的巨分子PRL(MPRL)，主要是PRL与自身抗体形成的免疫复合物，也是PRL免疫学检测的重要组成部分。

发明内容

发明人提供了一种抗PRL蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体重链和轻链可变区氨基酸序列分别是SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列所编码。

进一步地，所述单克隆抗体制备过程中，免疫小鼠所用的抗原为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列编码，经由大肠杆菌重组表达的重组蛋白。

进一步地，所述单克隆抗体特异性识别人PRL蛋白。

进一步地，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCC NO.22311的杂交瘤细胞系产生。所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞系2C10D5H11，分类命名为：小鼠杂交瘤细胞系，该细胞系已于2021年04月29日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

进一步地，所述抗PRL蛋白为小鼠IgG1亚型单克隆抗体。

发明人还提供了一种抗PRL蛋白单克隆抗体的制备方法，其免疫小鼠所用的抗原为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列编码，经由大肠杆菌重组表达的重组蛋白。

发明人还提供了一株分泌抗PRL蛋白的杂交瘤细胞系，所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞系2C10D5H11，所述细胞系保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC NO.22311。

发明人还提供以上任一所述的抗PRL蛋白单克隆抗体在人PRL蛋白免疫检测中的用途。

进一步地，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。