[发明专利]外周血单个核细胞的培养液及培养方法

权利要求书

1.外周血单个核细胞(PBMC)培养液，其特征在于，所述培养液包括：基础培养基DMEM/F12和血细胞培养基StemPro-34，以及细胞生长因子、L-抗坏血酸、β-疏基乙醇、亚硝酸钠、乙醇胺、ROCK抑制剂、人血清白蛋白、转铁蛋白、肝素钠和AHR抑制剂；

优选地，所述ROCK抑制剂为Thiazovivin、Y-27632或KD-025；更优选地，所述ROCK抑制剂的浓度为1-10μM/mL，更优选为5μM/mL；

优选地，所述AHR抑制剂为SR1、PD98059、CH-223191、AHR antagonist 2、AHRantagonist 4、GNF351或PDM2；更优选地，所述AHR抑制剂浓度为0.5-5μM/mL，更优选为2μM/mL。

2.如权利要求1所述的外周血单个核细胞培养液，所述培养液还包括去乙酰化酶抑制剂；

优选地，所述去乙酰化酶抑制剂为VPA、NaBu、TSA或SAHA；更优选地，所述去乙酰化酶抑制剂浓度为0.5-5μM/mL，更优选为2μM/mL。

3.如权利要求1或2所述的外周血单个核细胞培养液，所述培养液还包括GSK-3抑制剂；

优选地，所述GSK-3抑制剂为CHIR99021、SB 216763、TWS119、LY2090314、Tideglusib或小分子化合物BIO；更优选地，所述GSK-3抑制剂浓度为0.1-1μM/mL，更优选为0.5μM/mL。

4.如权利要求1-3任一项所述的外周血单个核细胞培养液，其中所述的细胞生长因子包括SCF、IGF-1、FLT-3L、TPO、EPO和GM-CSF。

5.如权利要求4所述的外周血单个核细胞培养液，其中生长因子SCF的浓度为10-100ng/mL，IGF-1的浓度为10-100ng/mL，FLT-3L的浓度为10-100ng/mL，TPO的浓度为10-100ng/mL，EPO的浓度为10-100ng/mL，GM-CSF的浓度为10-100ng/mL。

6.如权利要求1-3所述的外周血单个核细胞培养液，其中所述的细胞因子SCF浓度为25ng/mL，IGF-1浓度为25ng/mL，FLT-3L浓度为20ng/mL，TPO浓度为25ng/mL，EPO浓度为30ng/mL，GM-CSF浓度为25ng/mL。

7.如权利要求1-6任一项所述的外周血单个核细胞培养液，其中L-抗坏血酸浓度为100μM-1mM/mL，优选为500μM/mL；β-疏基乙醇浓度为1-10μM/mL，优选为5μM/mL；亚硝酸钠浓度为1-10μM/mL，优选为5μM/mL；乙醇胺浓度为1-10μM/mL，优选为5μM/mL；人血清白蛋白浓度为5-50g/L，优选为10g/L；转铁蛋白浓度为50-500μg/mL，优选为75μg/mL；肝素钠浓度为50-500μg/mL，优选为250μg/mL。

8.如权利要求1-7任一项所述的外周血单个核细胞培养液，其中DMEM/F12培养基和血细胞培养基StemPro-34的体积比为1：0.9-1.3，优选为1：1。

9.外周血单个核细胞(PBMC)的培养方法，所述方法包括：在权利要求1-8任一项所述的PBMC培养液中培养外周血单个核细胞。