[发明专利]一种核糖体σ因子B及其突变体在提升利普司他汀产量中的应用

说明书

本发明公开了一种核糖体σ因子B及其突变体在提升利普司他汀产量中的应用。该核糖体σ因子B的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。本申请筛选得到的核糖体σ因子B及其突变体过表达均能提高利普司他汀的产量。

本申请是申请日为2020-10-29，申请号为202011176931.9，专利名称为“一种核糖体σ因子及其突变体和编码得到的蛋白在提升利普司他汀产量中的应用”的分案申请。

技术领域

本发明属于微生物基因工程技术领域，具体涉及一种核糖体σ因子及其突变体在提升利普司他汀产量中的应用。

背景技术

利普司他汀的四氢衍生物-奥利司他作为目前通过美国FDA、欧盟EMA和中国SFDA认证的不抑制食欲，不作用于中枢神经系统的肥胖症治疗药物，全球超过4千万人服用并成功减重，是目前最畅销的减肥产品。作为长效的特异性胰脂肪酶抑制剂，能阻止甘油三酯水解为可被小肠粘膜吸收的游离脂肪酸和单酰基甘油，从而减少热量摄入，控制体重。而利普司他汀最初是从链霉菌Streptomyces toxytricini中分离得到，具有β-丙内酯结构单元，其2，3位分别被6碳烷基烃链和13碳烷基烃链所取代，13碳烷基烃链C5位上的羟基则和N-甲酸基-L-亮氨酸形成酯键。由于利普司他汀分子结构复杂，化学合成工艺复杂，需消耗大量的人力与物力。目前利普司他汀的生产主要采用半生物发酵工艺，相比化学方法减少了有毒溶媒的使用，大大减少了对环境造成污染，以及毒性物质残留。

目前，国内外对利普司他汀产生菌合成利普司他汀的研究主要采用单因素试验和正交设计实验相结合的方法，优化发酵培养基和发酵参数，如添加生物素和ATP对脂类和利普司他汀合成的影响(董惠钧等，添加生物素和ATP对毒三链霉菌脂类和利普司他汀合成的影响，中国医药工业杂志，2014，01期，第19-24页)。

核糖体σ转录因子是RNA聚合酶的重要组成部分，在原核生物的转录过程中发挥重要的作用。如在Streptomyces avermitilis中过表达frr会增加阿维菌素的产量(Li L etal,(2010)Over expression of ribosome recycling factor causes increasedproduction of avermectin in Streptomyces avermitilis strains.J Ind MicrobiolBiotechnol 37(7):673–679)，但目前影响利普司他汀合成的核糖体σ转录因子未见报道。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种核糖体σ因子及其突变体和编码得到的蛋白在提升利普司他汀产量中的应用，本发明通过基因组测序及生物信息学分析对其核糖体因子进行比较分析，发现15个不同的核糖体因子，后通过评价，发现在Streptomycestoxytricini中过表达核糖体σ转录因子A和B能提高利普司他汀的产量，并提供两个核糖体σ转录因子A和B的突变体，及其在利普司他汀生产中的应用。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种核糖体σ因子在提升利普司他汀产量中的应用，该核糖体σ因子为核糖体σ因子A或核糖体σ因子B。

进一步地，核糖体σ因子A的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。

进一步地，核糖体σ因子B的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。

一种如上述所述的核糖体σ因子A的突变体，该突变体的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。