[发明专利]测定人体壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)含量的磁微粒化学发光检测试剂盒

说明书

本发明为测定人体壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)含量的磁微粒化学发光检测试剂盒，包括：磁分离试剂、R1试剂、R2试剂、校准品液系列和化学发光底物液；磁分离试剂包括包被壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)单克隆抗体的免疫磁珠，R1试剂为样品处理液，R2试剂为碱性磷酸酶标记的壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)单克隆抗体稀释液，校准品液系列为含有不同浓度壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)抗原的稀释液，化学发光底物液为碱性磷酸酶催化发光的底物液；所述R1试剂包括缓冲液、能促进碱性磷酸酶反应的表面活性剂和鼠抗。该试剂盒工艺简单、线性范围宽、检测速度快、灵敏度高、无污染、操作简单、特异性好并且成本低廉。

技术领域

本发明涉及医用诊断试剂领域，特别是涉及一种采用磁微粒化学发光技术和抗原-抗体结合技术检测人体壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)含量的磁微粒化学发光检测试剂盒。

背景技术

壳多糖酶3样蛋白1(Chitinase-3-like protein 1，缩写为CHI3L1):chitinase-3-like蛋白1(CHI3L1)，又称人软骨糖蛋白39(YK-40)，是几丁质酶蛋白家族的一员，是一种分泌型糖蛋白，分子量约40kDa。

通过系统生物学方法，结合二代测序表达谱技术和蛋白质组学技术，发现CHI3L1可作为肝硬化的诊断、预后评估、治疗效果监测及病程监测的标记物。研究表明，CHI3L1诊断显著肝纤维化ROC曲线下面积均高于HA、LN、PⅢNP和CⅣ。血清CHI3L1水平在酒精性肝硬化病人中升高。Kamal等的研究表明血液中的CHI3L1蛋白水平与丙肝病毒慢性感染和肝纤维化有关。

对于中国人群乙肝病毒感染后血液中CHI3L1水平与肝纤维化和肝硬化的关系，用最新的二代测序技术分析表明:肝细胞CHI3L1的表达量是552，分析的其他15个组织器官中(心脏，脑，胸，大肠，肾脏,肺，前列腺，卵巢，肌肉，脂肪，淋巴结，甲状腺，肾上腺，血液白细胞，睾丸)，最高的表达是在肾脏，为36。肝细胞表达量为其他组织器官的15-227倍。胞外基质蛋白的增加和积累是肝纤维化过程的起因。CHI3L1是肝脏表达最多的，分泌到胞外基质的蛋白。因此，CHI3L1表达水平反映了肝纤维化的程度。

现有技术壳多糖酶3样蛋白1的检测方法主要有酶联免疫法、免疫层析、化学发光法等，然而这些方法具有工艺复杂，线性范围窄(最大线性6-1500pg/mL)，检测时间长(检测时间一般为60min以上)等缺点，无法满足临床需求。

因此，目前尚需一种污染小、线性范围宽、灵敏度高、操作简单、自动化程度高、特异性好、成本低、检测速度快的壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)检测试剂盒和使用方法。

发明内容

本发明旨在开发一种工艺简单、线性范围宽、检测速度快、灵敏度高、无污染、操作简单、特异性好并且成本低廉的一种测定人体壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)含量的磁微粒化学发光检测试剂盒。

基于上述目的，本发明提供一种测定人体壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)含量的磁微粒化学发光检测试剂盒，包括：磁分离试剂、R1试剂、R2试剂、校准品液系列和化学发光底物液；磁分离试剂包括包被壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)单克隆抗体的免疫磁珠，R1试剂为样品稀释液，R2试剂为碱性磷酸酶标记的壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)单克隆抗体稀释液，校准品液系列为含有不同浓度壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)抗原的稀释液，化学发光底物液为碱性磷酸酶催化发光的底物液；所述R1试剂包括缓冲液、能促进碱性磷酸酶反应的表面活性剂和鼠抗。

磁分离试剂中包被壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)单克隆抗体的免疫磁珠浓度为1.4-1.6mg/mL，封闭液中加入聚乙烯吡咯烷酮。

所述包被壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)单克隆抗体的免疫磁珠的包被方法为：

(1)洗涤磁珠：取100mg/mL的磁珠100μL，加入0.05M的MES缓冲液1mL，混匀5分钟，磁分离，去上清，重复洗涤3次；