[发明专利]一种抑制或杀灭东方黏虫的方法及其应用

说明书

本发明涉及一种抑制或杀灭东方黏虫的方法及其应用，具体涉及一种抑制或杀灭东方黏虫的方法和检测植物基因组是否插入Cry1B.868基因的方法。其中，所述抑制或杀灭东方黏虫的方法包括：(1)提供基因组插入编码SEQ ID NO:2所示Cry1B.868蛋白的基因的植物，所述植物表达Cry1B.868蛋白，产生东方黏虫抗性；和(2)所述植物与东方黏虫接触，抑制或杀灭所述东方黏虫。本发明发现插入该基因后，植物显示出优良的东方黏虫抗性，东方黏虫的杀虫率可达68％～76％。

技术领域

本发明涉及抗虫基因领域，具体而言，涉及一种抑制或杀灭东方黏虫的方法及其应用。

背景技术

目前，农业生产上面临的生物胁迫(如病害和虫害等)和非生物胁迫(如旱害、寒害和盐害等)造成农作物生长势减弱，产量降低，给全球粮食安全造成巨大威胁。其中，虫害是影响农林生产力的主要生物胁迫因素之一。例如，东方黏虫(Mythinmaseparata)又名行军虫、剃枝虫，是中国重大农作物病虫之一，主要危害小麦、水稻、玉米、高粱、糜子等禾谷类作物，有报道称东方黏虫已经成为我国危害最为严重的玉米害虫。因此，开发有效针对东方黏虫的防控方法具有重要意义。

随着使用化学农药进行害虫防治造成的环境问题愈发严重，生物杀虫剂的使用逐渐进入人们的视野。苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt)是一种革兰氏阳性菌，能够产生杀虫晶体蛋白(Insecticidal crystal proteins，ICPs)和营养期杀虫蛋白(Vegetative insecticidal proteins，Vips)等不同类型的杀虫蛋白。其中，Cry蛋白是在芽胞形成期于芽胞内形成的一类杀虫晶体蛋白，对大多数鳞翅目害虫具有良好抗性。

在中国专利CN201980049875.1中证明Cry1B.868和Cry1Da_7基因共表达可表现出对鳞翅目害虫秋夜蛾、玉米穗蛾、西南玉米蛀虫和甘蔗蛀虫的抗性。然而，目前还未见通过Cry1B.868蛋白控制东方黏虫的相关报道。

有鉴于此，特提供本发明。

发明内容

本发明提供一种抑制或杀灭东方黏虫的方法和检测植物基因组DNA是否插入Cry1B.868基因的方法。

在第一方面，本发明提供一种抑制或杀灭东方黏虫的方法，所述方法包括：(1)提供基因组插入编码SEQ ID NO:2所示Cry1B.868蛋白的基因的植物，所述植物表达Cry1B.868蛋白，产生东方黏虫抗性；和(2)所述植物与东方黏虫接触，抑制或杀灭所述东方黏虫。

在一些具体的实施方式中，所述表达Cry1B.868蛋白的基因具有如SEQ ID NO:1所示核苷酸序列。

在一些具体的实施方式中，所述植物为玉米、小麦、水稻或高粱。

在一些具体的实施方式中，所述表达Cry1B.868蛋白的基因以单拷贝插入所述植物的基因组。

在一些具体的实施方式中，所述植物的Cry1B.868蛋白表达量为3～4μg/g叶片。

在第二方面，本发明还提供一种检测植物基因组是否插入Cry1B.868基因的方法，取植物样本的基因组DNA进行PCR反应，根据PCR结果判断所基因组DNA是否插入Cry1B.868基因；其中PCR反应使用具有如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示序列的引物对，或使用SEQID NO:9和SEQ ID NO:10所示序列的引物对和SEQ ID NO:11所示的探针。

在一些具体的实施方式中，所述Cry1B.868基因表达如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

在一些具体的实施方式中，所述Cry1B.868基因具有如SEQ ID NO:1所示核苷酸序列。

术语定义