[发明专利]一种快速生长三倍体长牡蛎“海大1号”的培育方法

权利要求书

1.一种快速生长三倍体长牡蛎“海大1号”的培育方法，其特征在于，该培育方法包括以下步骤：

（1）获得高杂合度三倍体：以二倍体长牡蛎“海大1号”为基础群体，通过抑制二倍体长牡蛎“海大1号”受精卵第一极体排放获得三倍体长牡蛎“海大1号”；

（2）以步骤（1）得到的三倍体长牡蛎“海大1号”雌性为母本，以二倍体长牡蛎“海大1号”雄性作为父本，利用细胞松弛素B处理受精卵，抑制其受精卵第一极体排放获得四倍体长牡蛎“海大1号”；获得的四倍体长牡蛎“海大1号”进行自繁之后，镜检后挑选四倍体长牡蛎“海大1号”自繁群体中的雄性与二倍体长牡蛎“海大1号”雌性杂交来获得三倍体长牡蛎“海大1号”；

（3）以步骤（2）得到的四倍体长牡蛎“海大1号”雄性和二倍体长牡蛎“海大1号”雌性杂交来获得三倍体长牡蛎“海大1号”，获得受精卵；

（4）当步骤（3）得到的受精卵出现第一极体后，将该受精卵转移到培育容器中进行孵化及幼虫培育。

2.如权利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步骤（1）中，解剖取卵并用800目筛绢过滤，除去组织碎块和组织液成分，然后将卵子加入24~25℃的砂滤海水中进行熟化；精卵混合后开始计时，授精5分钟后，用0.5mg/L的细胞松弛素B处理，处理15min或开始出现第一极体时处理结束。

3.如权利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所述步骤（2）中，解剖镜检后挑选其中卵子数量多且呈卵形的二倍体长牡蛎“海大1号”雌性作为母本；所用三倍体母本卵子数量至少100万粒且授精前卵子呈圆形或接近圆形；所述母本和父本均为二龄长牡蛎。

4.如权利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步骤（2）中，使用流式细胞仪对步骤（1）中所得二龄三倍体长牡蛎“海大1号”进行非致死的倍性检测，解剖镜检后挑选卵量大，至少100万粒、卵形较好的个体作为母本，解剖取卵并用800目筛绢过滤，除去组织碎块和组织液成分，然后将卵子加入24~25℃的砂滤海水中进行熟化；精卵混合后开始计时，授精8~10分钟后，用0.5mg/L的细胞松弛素B处理15分钟，抑制受精卵第一极体排放。

5.如权利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步骤（3）中，每个卵子周围5-10个精子即可保证受精率达到90%以上。

6.如权利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步骤（4）中，将70-80%受精卵出现第一极体时作为受精卵转移到培育容器进行孵化的时机，此时转移受精卵能够保证90%以上的卵裂率。

7.如权利要求1所述的培育方法，其特征在于，上述方法还包括检测步骤：使用流式细胞仪采用非致死的倍性检测方法分别挑选出步骤（2）和（3）的三倍体和四倍体长牡蛎“海大1号”亲贝，并检测四倍体长牡蛎“海大1号”和二倍体长牡蛎“海大1号”杂交获得的三倍体长牡蛎“海大1号”的三倍体率。