[发明专利]一种检测金黄色葡萄球菌的引物、试剂盒和方法

权利要求书

1.一种检测金黄色葡萄球菌的引物组，其特征在于，它是能扩增靶基因的特异碱基序列的引物组；所述靶基因是DUF1361 domain-containing protein，GenBank登录号为CP038229.1，所述特异碱基序列是靶基因的第704683-705300位碱基序列，如SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的引物组，其特征在于，它包括如下引物：

外引物F3：序列如SEQ ID NO.2所示；

外引物B3：序列如SEQ ID NO.3所示；

内引物FIP：序列如SEQ ID NO.4所示；

内引物BIP：序列如SEQ ID NO.5所示。

3.一种检测金黄色葡萄球菌的试剂盒，其特征在于，它包括权利要求1或2所述的引物组。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，它包括如下体积份数的各组分：

10×缓冲液：2.5份、8.0U/μL的Bst 2.0DNA聚合酶：1份、100mM的硫酸镁水溶液：1.5份、10mM的dNTP水溶液：3份、5M的甜菜碱水溶液：4份、10μM的外引物F3水溶液：0.5份、10μM的外引物B3水溶液：0.5份、10μM的内引物FIP水溶液：4份、10μM的内引物BIP水溶液：4份、水：2份；

所述10×缓冲液中含有200mM的pH为8.8的Tris-HCl、500mM的氯化钾、100mM的硫酸铵、20mM的硫酸镁和1％v/v的吐温-20。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，它还包括显色剂，所述显色剂为羟基萘酚蓝、SYBR^TM Green I、溴化乙啶或钙黄绿素；优选为羟基萘酚蓝。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述羟基萘酚蓝的用量为：1体积份的3mM羟基萘酚蓝水溶液。

7.如权利要求4～6任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述水为无酶水。

8.一种检测金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)提取待测样品基因组DNA；

(2)将步骤(1)提取的DNA与权利要求4～6任一项所述的试剂盒的各组分混合形成反应体系；

(3)将步骤(2)得到的反应体系在60～65℃扩增反应30～60分钟，再于75～85℃保持1～3min终止反应；

(4)采用凝胶电泳法检测和/或肉眼观察得到扩增结果。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述反应体系中不含显色剂，步骤(4)采用凝胶电泳检测得到扩增结果。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，还包括如下步骤：所述反应体系中含有显色剂，步骤(4)采用肉眼观察得到扩增结果。