[发明专利]L-丝氨酸生产菌及其构建方法在审
| 申请号： | 202111278482.3 | 申请日： | 2021-10-30 |
| 公开（公告）号： | CN114085858A | 公开（公告）日： | 2022-02-25 |
| 发明（设计）人： | 谢沛;岳明瑞;曹华杰;郭永胜 | 申请（专利权）人： | 新泰市佳禾生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12P13/06;C12N15/55;C12N15/54;C12N15/53;C12N15/60;C12R1/19 |
| 代理公司： | 济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业) 37240 | 代理人： | 高强 |
| 地址： | 271200 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 丝氨酸 生产 及其 构建 方法 | ||
1.一种L-丝氨酸生产菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将大肠杆菌中的gpmA、sdaA、mtfA、pta、glyA、sdaC、serA、sstT、tdcC、aceA和cycA基因敲除，获得大肠杆菌工程菌；
(2)将serB基因用sphⅠ和AaaI酶切处理，将serC基因用NcoⅠ和BglⅡ酶切处理，将酶切处理后的serB基因和serC基因整合到质粒PQE-N上，获得第一重组表达载体；
将pGEX-kan质粒用ecoNⅠ和ZraⅠ双酶切，再将serAΔ197基因整合到双酶切处理后的质粒pGEX-kan上，获得第二重组表达载体；
(3)将获得的第一重组表达载体和第二重组表达载体导入到步骤(1)获得的大肠杆菌工程菌中，即构建得到L-丝氨酸生产菌。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，基因敲除的顺序为：先敲除sstT、sdaC、tdcC、cycA基因，再敲除mtfA、glyA、pta、sdaA基因，再敲除aceA、gpmA基因，最后敲除serA基因。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，serB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；serC基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，质粒PQE-N的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述第一重组表达载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，pGEX-kan质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，所述serAΔ197基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。
8.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述第二重组表达载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。
9.由权利要求1-8任一项所述的构建方法构建的L-丝氨酸生产菌。
10.权利要求9所述的L-丝氨酸生产菌在发酵生产L-丝氨酸中的应用。
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