[发明专利]一种以大肠杆菌在奶牛乳腺上皮细胞中调控免疫作用的方法

说明书

本发明提供了一种以大肠杆菌在奶牛乳腺上皮细胞中调控免疫作用的方法，其包括如下步骤：细胞培养、使用大肠杆菌进行细胞处理。本发明提供的方法能够使用野生A型大肠杆菌构建炎症模型，使用一种特定的大肠杆菌进行了对于奶牛乳腺上皮炎症反应的调控。

技术领域

本发明涉及微生物培养技术领域，特别是涉及一种以大肠杆菌在奶牛乳腺上皮细胞中调控免疫作用的方法。

背景技术

肠杆菌是自然界中普遍存在的环境致病菌，可引起人和动物多种不同程度的感染。奶牛乳房炎病因复杂多样，病原菌感染是奶牛乳房炎发生的主要生物诱因，其中大肠杆菌是引起奶牛乳房炎的主要环境致病菌。Clermont等最先通过三重PCR的方式简单快速的对大肠杆菌进行种系发育分型，此方法以具有进化特征的基因chuA、yjaA和TspE4.C2为目的基因进行PCR试验，再按不同基因姐合方式进行分型。从系统发育角度可将大肠杆菌分为4种主要类型，即A、B1、B2和D型。其中，A型多为环境共生菌，在奶牛乳房炎病料中分离率较高。

鉴于A型大肠杆菌在自然界中的来源广泛，如果将A型大肠杆菌投入奶牛乳房炎的相关应用中必将有着巨大的优势和优点。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述和/或现有中调控奶牛乳腺上皮细胞中免疫作用的方法中存在的问题，提出了本发明。

因此，本发明其中一个目的是，克服现有产品的不足，提供一种以大肠杆菌在奶牛乳腺上皮细胞中调控免疫作用的方法。

为解决上述技术问题，根据本发明的一个方面，本发明提供了如下技术方案：一种以大肠杆菌在奶牛乳腺上皮细胞中调控免疫作用的方法，其包括如下步骤：

细胞培养：奶牛乳腺上皮细胞使用培养基进行培养，得到培养后的奶牛乳腺上皮细胞；

细胞处理：将奶牛乳腺上皮细胞培养中途更换含有特定微生物的培养基将进行培养。

作为本发明所述以大肠杆菌在奶牛乳腺上皮细胞中调控免疫作用的方法的一种优选方案，其中：细胞培养中，所述培养基为RM[I1640培养基。

作为本发明所述以大肠杆菌在奶牛乳腺上皮细胞中调控免疫作用的方法的一种优选方案，其中：细胞培养中，所述完全培养基成分为比例90％的培养基和10％的胎牛血清。

作为本发明所述以大肠杆菌在奶牛乳腺上皮细胞中调控免疫作用的方法的一种优选方案，其中：细胞培养中，培养的温度为37℃，CO₂浓度为5％。

作为本发明所述以大肠杆菌在奶牛乳腺上皮细胞中调控免疫作用的方法的一种优选方案，其中：细胞处理中，待细胞培养至70％时，更换培养基。

作为本发明所述以大肠杆菌在奶牛乳腺上皮细胞中调控免疫作用的方法的一种优选方案，其中：细胞处理中，所述特定微生物包括大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。

作为本发明所述以大肠杆菌在奶牛乳腺上皮细胞中调控免疫作用的方法的一种优选方案，其中：细胞处理中，所述特定微生物包括野生A型大肠杆菌、野生B1型大肠杆菌、标准大肠杆菌ATCC25922、标准金黄色葡萄球菌ATCC25923。

作为本发明所述以大肠杆菌在奶牛乳腺上皮细胞中调控免疫作用的方法的一种优选方案，其中：细胞处理中，所述特定微生物为野生A型大肠杆菌。

作为本发明所述以大肠杆菌在奶牛乳腺上皮细胞中调控免疫作用的方法的一种优选方案，其中：细胞处理中，特定微生物在培养基中的浓度为1x10⁷CFU/mL。