[发明专利]一种胡芦巴叶提取物检测方法

说明书

本发明提供一种胡芦巴叶提取物的检测方法，将胡芦巴叶通过超声醇提、溶剂萃取法得到胡芦巴叶提取物。本发明将高效液相色谱与DAD检测器及四极杆飞行时间串联质谱联用，对胡芦巴中的黄酮提取物进行了表征。本发明能够实现8种成分的有效分离，建立了标准可靠的检测方法，为胡芦巴叶提取物的开发和进一步研究提供了参考。

技术领域

本发明涉及中药检测领域，具体涉及一种胡芦巴叶提取物检测方法。

背景技术

胡芦巴(Trigonella foenum-graecum L.)为豆科胡芦巴属一年生草本植物。胡芦巴属药食同源之品，其干燥成熟的种子作为常用中药收入《中华人民共和国药典》。目前已从胡芦巴中分离和研究了多种有效成分，主要包括生物碱、皂苷和黄酮类化合物，这些成分已被证实其潜在的药用价值。除了其已知的药用价值，如胃兴奋剂、抗糖尿病和半乳糖(乳糖诱导)效应外，有研究还表明其具有降低胆固醇血症、抗脂血症、抗氧化剂、护肝、抗炎、抗菌、抗真菌、抗溃疡、抗结石、抗癌药和其他杂酚的药物作用。这些研究大多使用了胡芦巴种子粉末或不同形式的提取物，而对其叶子提取物研究的很少。

李建峰等(食品研究与开发,2020,v.41；No.394(21):162-168)以葫芦巴叶为研究对象，采用同时蒸馏萃取法，配合气相色谱-质谱技术(gas chromatography-massspectrometer，GC-MS)系统分析葫芦巴叶中挥发性成分并研究其抗氧化活性，但并未对胡芦巴叶中的其他有效成分作进一步研究，因此对胡芦巴叶中含有的其他组分进行分析及研究很有必要，有利于胡芦巴叶产品的进一步开发与利用。

发明内容

为了弥补上述现有技术方案的不足，本发明提供一种胡芦巴叶提取物中黄酮类化合物的分离检测方法。

本发明的技术方案为：

将胡芦巴叶阴干、粉碎，经乙醇超声提取，减压浓缩，得到胡芦巴叶醇提物浸膏。将醇提物浸膏加水混悬，依次用石油醚和乙酸乙酯各萃取，将水萃取组分经减压浓缩、冷冻干燥，得胡芦巴叶提取物。

在本发明的具体实施方式中胡芦巴叶提取物通过以下方式得到：将胡芦巴叶阴干、粉碎，经95％乙醇超声提取，提取条件为：料液比1:10(g/mL)，提取5次，每次1h，提取温度60℃，超声频率40kHz。提取后合并上清液，减压浓缩，得到胡芦巴叶醇提物浸膏。将醇提物浸膏加水混悬，依次用2倍体积石油醚和乙酸乙酯各萃取5次，将水萃取组分经减压浓缩、冷冻干燥，得胡芦巴叶提取物。

进一步地，将上述提取物与甲醇混合，后经离心，取其上清液，得到供试品溶液。

在本发明的技术方案中，采用高效液相色谱法对胡芦巴叶提取物中的相关物质进行分离检测，其中检测器可以为紫外检测器、质谱检测器、核磁检测器、荧光检测器等常规用于表征检测物质结构的检测器。

在本发明的具体实施方案中，高效液相色谱的色谱条件为液相条件：流动相A：甲酸水溶液，流动相B：甲酸乙腈；色谱柱：C18；梯度洗脱程序如下：

其中，流动相A甲酸水溶液中甲酸的浓度为0.05％～0.5％，优选0.1％，流动相B甲酸乙腈溶液中甲酸的浓度为0.05％～0.5％，优选0.1％。

上述的梯度洗脱程序及流动相配比，能够更好地分离杂质，有利于胡芦巴叶提取物中相关物质的检出，是检测结果的准确度及精密度更高。

进一步地，在本发明的技术方案中高效液相色谱的流速为：0.1～0.5mL·min^-1，进样量为3μL，柱温为：40～60℃。

其中，流速优选0.3mL.min^-1,柱温优选50℃。

上述优选色谱条件有利于进一步提高对胡芦巴叶提取物中相关物质的检测灵敏度。