[发明专利]一种人血清白蛋白多克隆抗体胶体金层试纸条及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种人血清白蛋白多克隆抗体胶体金层试纸条及其制备方法和应用，涉及生物检测技术领域。包括PVC板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜及吸水垫；所述样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜及吸水垫依次贴敷于所述PVC板上，并采用搭接的方式连接；所述硝酸纤维素膜上从所述吸水垫至所述金标垫方向依次设有相互平行的检测线和质控线。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种人血清白蛋白多克隆抗体胶体金层试纸条及其制备方法和应用。

背景技术

多克隆抗体(polyclonalantibody)是用包含多种特异性的抗原表位的天然抗原免疫动物，刺激动物机体多个B细胞克隆被激活产生针对多种不同抗原表位抗体的总和，多克隆抗体存在于血清中即所获得的免疫血清实际上是含有不同抗原表位的多种抗体的混合物。多克隆抗体作用全面、具有中和抗原、免疫调理、介导补体依赖的细胞毒作用(ADCC)等重要作用且具有来源广泛、易制备等优点。抗原(antigen,Ag)是指所有能激活和诱导免疫应答的物质，通常指能被T、B淋巴细胞表面特异性抗原受体识别及结合，激活T、B细胞增殖、分化、产生免疫应答效应产物(特异性淋巴细胞或抗体)，并与效应产物结合，进而发挥适应性免疫应答效应的物质，

人血清白蛋白(HSA)作为血浆容量扩充剂，广泛应用于大出血、休克、烧伤、癌症、红白细胞增多症、白蛋白过少症等。正常情况下血清白蛋白一部分可由肾小球通过，几乎被肾小管重吸收。当肾小球病变时其滤过率增多，以致超过肾小管的重吸收而从尿中排出，便形成尿微量白蛋白，尿微量白蛋白在正常情况下排泄率每min超过20μg或者24h超过30mg，浓度为30～200mg/L，在早期发生病变的情况下，用常规方法无法检出。大量研究已证明尿微量白蛋白阳性是肾损伤尤其是肾小球损伤的早期标志，而检测尿微量白蛋白离不开白蛋白抗体，为此，本发明提供一种能够测量血浆或尿液白蛋白的胶体金层析试纸，为进一步研究尿微量白蛋白的检测技术奠定基础。

发明内容

本发明的目的在于针对上述现有技术存在的不足，本发明提供了一种人血清白蛋白多克隆抗体胶体金层试纸条制备方法。本发明利用胶体金层析间接法技术制备胶体金层析试纸条，即可以检测人血清白蛋白单克隆抗体也可以检测多克隆抗体，除了检测面较广外，还具有反应灵敏，检测方便、检测结果稳定，节约成本等特点。

本发明第一个目的是提供一种胶体金层试纸条，所述胶体金层试纸条包括：PVC板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜及吸水垫；所述样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜及吸水垫依次贴敷于所述PVC板上，并采用搭接的方式连接；其特征在于，所述硝酸纤维素膜上从所述金标垫至所述吸水垫方向依次设有相互平行的检测线和质控线；

所述质控线处标记二抗，所述二抗为蛋白A单克隆抗体；

所述检测线处标记抗原，所述抗原为人血清白蛋白；

所述金标垫是将胶体金与蛋白A融合蛋白混合经纯化和浓缩获得金标蛋白A融合蛋白溶液，随后将金标蛋白A融合蛋白溶液喷涂至预处理的玻璃纤维垫上而制得。

优选的，所述二抗溶液中蛋白A单克隆抗体浓度为0.5～1mg/mL；

所述抗原溶液中人血清白蛋白浓度为1mg/mL；

所述金标蛋白A融合蛋白溶液的浓度为25～100μg/mL。

优选的，所述样品垫与所述吸水垫分别设置于所述PVC板的两端部；

所述金标垫的一端位于所述样品垫的一端底部搭接；

所述硝酸纤维素膜的一端位于所述金标垫的另一端底部搭接；

所述硝酸纤维素膜的另一端位于所述吸水垫的一端底部搭接。

更优选的，所述搭接的重叠部分长度为0.2～0.3cm；所述检测线和质控线之间的距离为0.2～0.4cm。