[发明专利]重组人Sema4C蛋白、表达载体、宿主细胞以及应用

说明书

本申请公开了重组人Sema4C蛋白、表达载体、宿主细胞以及应用。通过选取人Sema4C基因21‑633aa区域中的若干结构域，构建其重组质粒，转染真核细胞HEK 293F细胞，进行体外重组表达，获得了相关结构域的目的蛋白。该方法具有转染周期短和快速获得目的蛋白的效果，能够应用于研发阶段的摸索和大规模高通量筛选蛋白。

技术领域

本申请涉及Sema4C基因技术领域，尤其涉及重组人Sema4C蛋白、表达载体、宿主细胞以及应用。

背景技术

Semaphorins家族是一种分泌型或跨膜蛋白，早期作为神经系统中一种发挥轴突导向功能的因子被发现，大部分蛋白通过其受体Plexins和Neuropilins家族发挥相应的生物学效应，包括:发育、调节细胞运动、血管生成、免疫调节、肿瘤形成和干细胞特性。一些Semaphorin家族成员参与了上皮细胞屏障的分离，与肿瘤的Epithelial-MesenchymalTransition(EMT)有关，例如，Sema3E通过激活PI3K/ERK/MAPK使Snail在细胞核内积聚来诱导EMT。例如，Sema4C在调控神经轴突的定向生长和肌管发育方面有重要作用，在人类宫颈癌、子宫内膜癌、乳腺癌和前列腺癌中均表达，并与淋巴转移等恶性行为相关。Sema4C在乳腺癌细胞过表达上调了转录因子Snail、Slμg和SOX-2，在肌细胞的分化过程中Sema4C是P38MAPK信号通路的重要激活因子。研究表明Sema4C在宫颈癌组织的过表达与恶性生物学行为有关，EMT与宫颈癌的进展密切相关，Seam4C成为宫颈癌侵袭转移的预测标记和治疗靶点。

因此在体外研究或人Seam4C结构和功能尤为重要。现有技术中，对人Seam4C蛋白的重组表达一般以原核宿主为主，但原核表达容易产生包涵体和无生物活性的可溶性蛋白。因此，需要寻找新型重组表达人Seam4C蛋白的宿主或表达形式，以利用获得体外获得大量的人Seam4C蛋白，以利于对该蛋白进行研究，为其作为抗肿瘤药物或诊断试剂提供帮助。

发明内容

有鉴于此，本申请的目的在于解决上述技术问题之一。

第一方面，本申请实施例公开了用于重组表达Sema4C蛋白的DNA分子，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述DNA分子具有Sema4C蛋白编码基因的21-663aa、1-497aa、30-497aa和556-644aa结构域序列中的至少一种。

第二方面，本申请实施例公开了一种Sema4C蛋白重组表达载体，所述表达载体以质粒为骨架构建，其中插入有融合基因，所述融合基因如SEQ ID NO.1所示，所述融合基因包含Sema4C蛋白编码基因的21-663aa、1-497aa、30-497aa和556-644aa结构域序列中的至少一种。

在本申请实施例中，所述融合基因还包含位于所述结构域5'端的第一序列和位于3'端的第二序列，所述第一序列如SEQ ID NO.2或3所示，，所述第二序列为C-6His、N-rabbit FC或C-Human FC-6His标签。

第三方面，本申请实施例公开了用于PCR扩增Sema4C蛋白重组表达载体融合基因的引物组，其中，所述结构域包括Sema4C蛋白编码基因的21-663aa、1-497aa、30-497aa和556-644aa结构域序列中的一种；所述引物组包括六对引物，所述六对引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4～15所示。

第四方面，本申请实施例公开了一种携带第二方面所述的重组表达载体的重组大肠杆菌。

第五方面，本申请实施例公开了一种用于表达Sema4C蛋白的重组表达载体的重组表达细胞，所述重组表达细胞为携带第二方面所述重组表达载体的HEK 293F细胞。

第六方面，本申请实施例公开了一种利用第五方面所述的重组表达细胞表达的重组蛋白。