[发明专利]GNAQ基因敲除系赤眼鳟模型构建与应用

权利要求书

1.一种GNAQ基因敲除系赤眼鳟模型构建方法，其特征在于，所述GNAQ基因敲除系赤眼鳟模型构建方法包括以下步骤：

步骤一，在未开始进行敲除工作前，通过赤眼鳟的全基因组测序技术及PCR技术获得赤眼鳟的GNAQ基因的基因组信息，确定GNAQ基因的内含子和外显子的序列；

步骤二，得到准确的基因组序列后，利用软件设计scGNAQ基因的敲除靶位点，同时设计好靶位点的gRNA引物scGNAQ-gRNA-F/R；

步骤三，利用PCR获得带有T7启动子的scGNAQ基因靶位点的gRNA片段；

步骤四，利用酶切及体外转录手段获得scGNAQ的gRNA mRNA和cas9mRNA；

步骤五，设计靶位点前后200bp的基因组筛选引物scGNAQ-screen-F/R，并通过PCR确定引物成功扩增scGNAQ靶位点附近的序列；

步骤六，繁殖季节时确定可用于繁殖的赤眼鳟亲本，通过人工催产的方式进行赤眼鳟的人工繁殖，获得单细胞期的赤眼鳟胚胎；

步骤七，将gRNA mRNA和cas9 mRNA共注射进单细胞期的赤眼鳟胚胎，性成熟后通过与野生型赤眼鳟杂交的方法筛选具有效突变的敲除系杂合子，再经过一代的自交便可获得可稳定遗传的scGNAQ基因敲除的赤眼鳟。

2.如权利要求1所述的GNAQ基因敲除系赤眼鳟模型构建方法，其特征在于，步骤一中，所述赤眼鳟的GNAQ基因为scGNAQ。

3.如权利要求1所述的GNAQ基因敲除系赤眼鳟模型构建方法，其特征在于，步骤六中，所述繁殖季节为每年的5月底至～7月初。

4.如权利要求1所述的GNAQ基因敲除系赤眼鳟模型构建方法，其特征在于，步骤七中，所述赤眼鳟胚胎至少为5000颗胚胎。

5.一种应用如权利要求1～4任意一项所述的GNAQ基因敲除系赤眼鳟模型构建方法构建得到的赤眼鳟模型。

6.一种如权利要求5所述的赤眼鳟模型在确定GNAQ基因在鱼类性腺分化及性成熟过程中功能的应用。