[发明专利]COI基因、引物对、试剂盒及其在土鳖虫真伪鉴定中的应用

权利要求书

1.COI基因在土鳖虫鉴定中的应用，其特征在于，所述COI基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

2.一种检测COI基因的引物对，其特征在于，所述引物对包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述COI基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.一种鉴定土鳖虫的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求2所述的引物对。

4.权利要求2所述引物对或权利要求3所述试剂盒在鉴定和/或辅助鉴定土鳖虫真伪中的应用。

5.一种鉴定和/或辅助鉴定土鳖虫真伪的方法，其特征在于，包括以下步骤：

以样品基因组DNA为模板，利用权利要求2所述的引物对或权利要求3所述试剂盒配制PCR反应体系，进行PCR扩增；

若得到扩增产物，则待测样品为真土鳖虫；若未得到扩增产物，则待测样品为伪土鳖虫。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应程序包括：95℃预变性5min；94℃变性30s；61℃退火30s，30个循环；72℃延伸5min。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系以25μL计，包括模板1μL、上游引物1μL、下游引物1μL、2×Taq Plus Master Mix 2.5μL和剩余ddH₂O。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述上游引物和下游引物的工作浓度均为10μmol/L；所述DNA模板的工作浓度为1.5～71.9μg/mL。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述扩增产物的鉴定方法包括测序或电泳；当鉴定方法为电泳时，扩增产物的电泳条带为100～200bp。

10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述扩增产物的核苷酸序列如SEQ IDNO.10所示。