[发明专利]一种检测非洲猪瘟病毒抗体的胶体金免疫层析试纸卡

说明书

本发明涉及免疫检测技术领域，公开了一种检测非洲猪瘟病毒抗体的胶体金免疫层析试纸卡。本发明提供了一种检测非洲猪瘟病毒抗体的免疫层析试纸卡，将非洲猪瘟病毒衣壳蛋白P72单体喷涂在标记物垫上，T线喷涂P72三聚体，所制得的试纸卡具有极高的灵敏度，同时本发明所述试纸卡还具备极高的特异性和准确性，结果直观可肉眼判断，可快速、特异地检出血清中非洲猪瘟病毒抗体，具有较高的实用价值，便于基层推广使用。

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域，具体涉及一种检测非洲猪瘟病毒抗体的胶体金免疫层析试纸卡。

背景技术

非洲猪瘟（African swine fever，ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fevervirus，ASFV）感染引起猪的一种急性、烈性传染病，呈世界性分布，ASFV是目前己知的虫媒病毒中唯一核酸为DNA的病毒。该病属于世界卫生组织（OIE）要求法定报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。该病以高热、精神沉郁、厌食、网状内皮系统出血、可视黏膜发红为特征，强毒株感染猪病程短，死亡率高达100%，给世界范围内养猪业造成巨大经济损失。

非洲猪瘟病毒是非洲猪瘟病毒科非洲猪瘟病毒属的唯一成员，是一种有囊膜的双链DNA病毒。在电镜下呈正六边形，正20面体结构，直径约200nm，由5层同心圆结构组成，由内到外依次为类核、核壳、内膜、衣壳和外囊膜。非洲猪瘟病毒可编码200多种蛋白质，其中P72蛋白是非洲猪瘟病毒的主要结构蛋白。目前已有报道基于P30和P54蛋白开发的ELISA抗体检测试剂盒和胶体金免疫层析抗体检测试纸卡，由于P72全长三聚体蛋白的制备困难，针对P72蛋白的胶体金免疫层析抗体检测试纸卡目前还未有报道。此前，通过对非洲猪瘟病毒天然衣壳蛋白P72的蛋白结构进行分析，采用特殊位点氨基酸突变的方式设计P72蛋白序列并通过酿酒酵母表达系统，我们已成功获得与天然结构完全相同的P72三聚体蛋白（CN202110522777.4）。

非洲猪瘟病毒抗体的检测方法有多种，世界动物卫生组织（OIE）推荐的诊断技术包括病原学检测和血清学试验。ELISA是国际卫生组织（OIE）规定的国际贸易检验方法。病毒分离与核酸检测，均是针对病原体本身进行的检测方法，能作为潜伏期、疾病初期以及症状明显期等多个时期的检测，主要包括病毒分离试验、红细胞吸附试验、PCR试验、实时荧光定量PCR试验等。血清学试验用于检测非洲猪瘟抗原或抗体，主要包括荧光抗体技术、酶联免疫吸附试验、免疫印迹检测和免疫层析检测等。

目前病原学检测、荧光抗体技术、免疫印迹检测对于技术条件以及设备要求高，费时费力，酶联免疫吸附试验检测所需抗原需要病毒感染细胞进行制备，存在散毒的风险，且ELISA试剂盒价格昂贵，限制在基层中推广使用。胶体金免疫层析技术是一种快速检测技术，操作简便，反应时间快，不需要任何仪器，结果清晰明辨，非常适于现场快速检测。由于目前没有针对非洲猪瘟的疫苗，所以检测出非洲猪瘟病毒抗体，则认为体内一定存在非洲猪瘟病毒。针对目前非洲猪瘟的流行状况和防控形势，对于非洲猪瘟病毒抗体检测要求特异性高、敏感性强、检测速度快、操作简便、结果简单清晰的检测方法，便于在基层推广使用。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种检测非洲猪瘟病毒抗体的胶体金免疫层析试纸卡，使得所述试纸卡在检测非洲猪瘟病毒抗体时具有更高的灵敏度、特异性和准确度。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种检测非洲猪瘟病毒抗体的免疫层析试纸卡，包括背衬以及在背衬上的样品垫、标记物垫、层析膜和吸水垫；所述标记物垫上标记有非洲猪瘟病毒衣壳蛋白P72单体的标记物，所述硝酸纤维素膜上的T线为非洲猪瘟病毒衣壳蛋白P72三聚体。其中，层析膜可选用常规的NC膜。