[发明专利]一种检测新型冠状病毒亚基因的荧光定量PCR方法及试剂盒

权利要求书

1.一种设计用于检测活性新型冠状病毒的组合物的方法，其特征在于，所述的方法包括：设计靶向Leader区和/或N基因区的探针、靶向Leader区的上游引物、靶向N基因区的下游引物，所述的上游引物包括在如SEQ ID NO.7所示序列的第四位引入突变的序列，所述的突变为将A突变为G，突变后的序列如SEQ ID NO.1所示，所述的下游引物包括如SEQ IDNO.2所示的序列，所述的探针包括如SEQ ID NO.3所示的序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的探针5’端以FAM荧光基团标记。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的探针3’端以BHQ1荧光基团标记。

4.一种用于检测活性新型冠状病毒的组合物，其特征在于，所述的组合物包括采用权利要求1-3任一项所述的方法设计的探针、上游引物、下游引物，其中，上游引物包括如SEQID NO.1所示的序列，下游引物包括如SEQ ID NO.2所示的序列，探针包括如SEQ ID NO.3所示的序列。

5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述的探针5’端以FAM荧光基团标记。

6.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述的探针3’端以BHQ1荧光基团标记。

7.一种诊断新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含权利要求4-6任一项所述的组合物。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含至少一种反应混合物，其中所述至少一种反应混合物包含以下一种或多种：DNA聚合酶、脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、阳性对照核酸、阴性对照核酸、对照引物、对照探针、内标核酸、内标核酸引物、内标核酸探针、KCl、MgCl2、乙酸钾、缓冲液、牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖、二甲基亚砜、甜菜碱、甲酰胺、甘油、聚乙二醇、非离子型去污剂、铵离子、乙二胺四乙酸。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述的阳性对照核酸为包含新型冠状病毒N亚基因片段的重组质粒。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述的重组质粒的载体为pMD19-T。

11.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述的新型冠状病毒N亚基因片段序列包括如SEQ ID NO.11所示的核苷酸序列。

12.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述的内标核酸为RNaseP。

13.根据权利要求12所述的试剂盒，其特征在于，所述的RNaseP的上游引物包括如SEQID NO.4所示的序列，RNaseP的下游引物包括如SEQ ID NO.5所示的序列，RNaseP的探针包括如SEQ ID NO.6所示的序列。

14.根据权利要求13所述的试剂盒，其特征在于，所述的RNaseP的探针的5’端以HEX荧光基团标记。

15.根据权利要求13所述的试剂盒，其特征在于，所述的RNaseP的探针的3’端以BHQ2荧光基团标记。

16.根据权利要求7-15任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包含说明书。

17.权利要求4-6任一项所述的组合物在制备诊断新型冠状病毒的试剂盒中的应用。

18.一种非诊断目的的检测活性新型冠状病毒的方法，其特征在于，所述的方法包括采用权利要求4-6任一项所述的组合物配制荧光定量PCR反应体系。