[发明专利]细胞治疗剂及其治疗病毒性肺炎的用途

权利要求书

1.细胞制剂在制备用于治疗流感病毒引起的病毒性肺炎的药物中的用途，所述细胞制剂由(1~10)×10⁶个/ml脐带间充质干细胞、氯化钠7~10mg/ml、绿原酸0.25~2.5mg/ml、山梨醇2~10mg/ml和水组成，所述脐带间充质干细胞是经传代培养至2~15代的细胞，所述脐带间充质干细胞是通过包括如下步骤的方法制备得到的：

(1)配制脐带组织冻存液：所述脐带组织冻存液中包含人血白蛋白和DMSO，配好的冻存液放在1℃至7℃的温度条件下低温冷藏；

(2)消毒和清洗：用消毒液酒精对脐带组织表面进行消毒，将脐带剪开，平铺，通过PBS缓冲液清洗脐带组织，以减少脐带组织上红细胞；

(3)脐带组织处理：将步骤(2)得到的脐带组织剪成组织块；

(4)脐带组织冷存：在1℃至7℃的低温环境下，将组织块和冻存液加入冻存容器中，然后将冻存容器放入程序降温装置，先在1℃至7℃的温度条件下低温冷藏0.2-2小时，再在-10℃至-150℃的温度条件下冷冻0.25-3天，然后将冻存容器于液氮中冷冻，备用；

(5)冻存脐带组织复苏：将步骤(4)冷冻的脐带组织从液氮中取出，解冻至20%-70%冻存液开始融化，利用间充质干细胞培养基清洗脐带组织，过滤去除废液，以使冻存的脐带组织复苏；

(6)脐带组织贴壁处理：另取细胞培养平皿，将组织块平铺于平皿中，每个平皿中的组织块数量维持在5-20块，使组织块风干2-50分钟直至组织贴在平皿上；

(7)脐带组织培养：沿平皿边缘慢慢加入间充质干细胞培养基至组织淹没即可；将平皿放进CO₂浓度为5%的37℃培养箱进行培养，培养至第3-7天时将平皿从培养箱取出，补加适量间充质干细胞培养基；在第9-11天时将平皿中的培养基移出，加入适量新鲜的间充质干细胞培养基，继续培养；在第11-13天时清除所有脐带组织块并继续培养；此后每1-3天进行一次全换液；

(8)细胞传代：当平皿内的贴壁细胞融合率达到50-70%时，使用消化酶使贴壁细胞脱离平皿底部；离心，去除上清液，得到P0代的脐带间充质干细胞；向此P0代细胞中加入间充质干细胞培养基重新悬浮细胞，再接种于T25细胞培养瓶进行传代并进行扩增培养；此后每1-3天换液一次，直至融合率达到70-90%后，得到P1代的脐带间充质干细胞，完成从P0代至P1代的细胞传代；依次重复上述从P0代到P1代的传代操作以分别进行P1代至P2代、P2代至P3代直至P15代的细胞传代，得到P1代至P15代的脐带间充质干细胞。

2.根据权利要求1的用途，步骤(4)脐带组织冷存照如下操作进行：在4℃的低温环境下，将组织块和冻存液加入冻存容器中，然后将冻存容器放入程序降温装置，先在4℃的温度条件下低温冷藏0.5小时，再在-80℃的温度条件下冷冻1天，然后将冻存容器于液氮中冷冻，备用。

3.根据权利要求1的用途，步骤(7)脐带组织培养照如下操作进行：沿平皿边缘慢慢加入间充质干细胞培养基至组织淹没即可；将平皿放进CO₂浓度为5%的37℃培养箱进行培养，培养至第4-6天时将平皿从培养箱取出，补加适量间充质干细胞培养基；在第10天时将平皿中的培养基移出，加入适量新鲜的间充质干细胞培养基，继续培养；在第12天时清除所有脐带组织块并继续培养；此后每2天进行一次全换液。

4.根据权利要求1的用途，其中制备所述脐带间充质干细胞还包括如下步骤：(9)针对步骤(8)所得脐带间充质干细胞，检测以下项目的至少一项：细胞活性、细胞污染、遗传病、HLA-ABC/DR配型； (10)将步骤(8)所得传代后的各代脐带间充质干细胞于液氮中冻存；(11)建立包含以上步骤(9)所检测的信息的脐带干细胞的数据库，并使该数据库与步骤(10)的冻存细胞进行关联。

5.根据权利要求1的用途，其中所述脐带组织冻存液中含有55-95重量份的人血白蛋白。

6.根据权利要求1的用途，其中所述脐带组织冻存液中含有4-20重量份的DMSO。

7.根据权利要求1的用途，其中所述脐带组织冻存液中含有7-15重量份的DMSO。