[发明专利]一种检测BK病毒和JC病毒的试剂及应用

说明书

本发明涉及一种检测BK病毒和JC病毒的试剂及应用，属于生物医药技术领域。BKV和JCV高度保守区中存在一段JCV片段缺口的区域。通过在缺口区域以外适合位置设计同时靶向BKV和JCV的引物探针体系，且仅在缺口区域设计反向引物特异性靶向BKV或JCV。通过本发明用于初筛，同时靶向BKV和JCV，有利于节约资源；且又可精准判断BKV或JCV，适合临床推广。通过本发明可预防BKV和JCV活化和及时评估相关疾病的治疗效果，弥补现有检测体系的缺陷和不足，使检测结果更加可靠。本发明兼顾BKV和JCV，可同时靶向二者进行初筛，且又可精准判断BKV或JCV，有利于及时的免疫抑制调整。

技术领域

本发明涉及一种检测BK病毒和JC病毒的试剂及应用，属于生物医药技术领域。

背景技术

多瘤病毒是常见的机会性病毒，人群携带率高。常在人类儿童时期建立感染并潜伏，待人体免疫力低下时活化并引起相关疾病。其中BK病毒和JC病毒(BKV和JCV)是最早发现和最被熟知的人多瘤病毒。BKV人群携带率超过85％，在免疫力正常的人群中并不发病。而对于免疫抑制剂服用者(如器官移植受者、自身免疫病患者等)、艾滋病患者等免疫力低下的人群、孕妇和老人，BKV可能导致严重的泌尿系统疾病，如能引起6％的肾移植受者发生多瘤病毒相关肾病(PyVN)，严重时导致移植肾丧失功能；能引起大约10％的造血干细胞移植受者发生出血性膀胱炎，且无有效的抗BKV药物。因此，BKV的早期诊断对于预防BKV相关疾病的发生至关重要。其中，荧光探针法实时定量聚合酶链式反应(qPCR)诊断是临床上应用普遍的BKV定量诊断方法。BKV的基因组分为早期编码区(含LT和sT基因)、晚期编码区(含Agno、VP1、VP2和VP3基因)和非编码调控区(NCCR)。除NCCR外，编码区均被用于设计qPCR诊断的靶区域。但已申请专利的有些引物探针体系需要优化，有些靶向区域有待优化。

JCV常在艾滋病患者中引起进行性白质脑病(PML)，死亡率高，临床亦缺乏有效的抗病毒手段。JCV在肾移植患者中引起的PML也有报道，大约5％的多瘤病毒相关肾病由BKV以外的多瘤病毒(尤其是JCV)导致。BKV引起的PML也有报道。BKV和JCV的序列相似度高达75％，且均可在人体尿液、血液和脑脊液样本中分布。因此，设计qPCR体系时需充分考虑靶标和特异性。对于初筛来说，同时靶向BKV和JCV的体系有利于节约资源；对于精准判断BKV或JCV相关疾病，就需要特异的qPCR体系。因此，本发明仅通过反向引物选择便可兼顾这两种情况，适合临床推广。

发明内容

本发明的目的是为解决如何通过变换反向引物而同时靶向或分别靶向BKV和JCV以定量诊断的技术问题。

为达到解决上述问题的目的，本发明所采取的技术方案是提供一种同时检测BK病毒和JC病毒的PCR试剂，包括通用正向引物，还包括同时靶向BK病毒和JC病毒的反向引物，反向引物的核苷酸序列为SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：3为gttggggccatcttcatatg。

本发明提供一种能同时靶向BK病毒和JC病毒，且能分别判断BK病毒或JC病毒的PCR试剂，包括通用正向引物，还包括同时靶向BK病毒和JC病毒的反向引物，核苷酸序列为SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：3为gttggggccatcttcatatg；靶向BK病毒的反向引物，核苷酸序列为SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：4为ttggctttttgggagctg；靶向JC病毒的反向引物，核苷酸序列为SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：5为gggtccttcctttctcct。

本发明提供一种上述PCR试剂在制备检测BK病毒和/或JC病毒的诊断试剂盒中的应用。

本发明提供一种上述PCR试剂在制备与BK病毒和/或JC病毒相关疾病的预后试剂盒中的应用。

本发明提供一种上述PCR试剂在非诊断方法和非治疗方法中的应用。

相比现有技术，本发明具有如下有益效果：