[发明专利]一种微生物单细胞代谢组学分析方法

权利要求书

1.一种微生物单细胞代谢组学分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、氧化铟锡导电玻璃片表面阵列化

使用激光蚀刻技术对氧化铟锡导电玻璃片进行基于定位引导图案的阵列化制备；

S2、微生物样品的前处理；

S3、细胞芯片的制备；

S4、进行MALDI质谱成像分析。

2.根据权利要求1所述的微生物单细胞代谢组学分析方法，其特征在于，所述步骤S2包括：

S2.1、清洗：将含微生物的培养基取出，离心后弃上清，加入超纯水洗涤；

S2.2、稀释：对洗涤后的细胞液进行梯度稀释，制成细胞悬液并计数。

3.根据权利要求2所述的微生物单细胞代谢组学分析方法，其特征在于，步骤S2.1中，所述离心转速为3000rpm，时长为5min。

4.根据权利要求2所述的微生物单细胞代谢组学分析方法，其特征在于，步骤S2.2中，所述细胞悬液密度为100～200个/uL。

5.根据权利要求1所述的微生物单细胞代谢组学分析方法，其特征在于，所述步骤S3具体包括：取S2.2获得的细胞悬液滴加于氧化铟锡导电玻璃片蚀刻点阵处中央位置，并放置于超净工作台吹干，完成细胞芯片制备，对细胞芯片进行显微拍照。

6.根据权利要求5所述的微生物单细胞代谢组学分析方法，其特征在于，滴加的细胞悬液体积是0.5uL。

7.根据权利要求1所述的微生物单细胞代谢组学分析方法，其特征在于，所述步骤S4具体包括：

S4.1、基质应用：对细胞芯片进行基质应用；

S4.2、阵列临摹：对应用基质后的细胞芯片表面蚀刻的图案进行基于微米级面积针头的临摹，而后完成第二次细胞芯片的成像；

S4.3、质谱成像：对第二次细胞芯片显微拍照图像进行单细胞标记，对细胞芯片进行非连续的质谱成像数据采集。

8.根据权利要求7所述的微生物单细胞代谢组学分析方法，其特征在于，步骤S4.1中，所述基质应用采用的是基于升华法的基质涂布方法。

9.根据权利要求7所述的微生物单细胞代谢组学分析方法，其特征在于，步骤S4.3中，所述非连续的质谱成像数据采集模式为fleximaging软件的tissue profiling模式，参数设置如下：漏斗射频幅度：150V；飞行时间＝0.9ms；传输光学频率＝4MHz；Q1质量：300m/z；射频幅度＝450Vpp；漏斗射频幅度＝150Vpp，质谱室恒温18℃，湿度保持在50％～60％。

10.权利1-9任一项所述方法在对微生物单细胞代谢物分析中的应用。