[发明专利]一种同时表达经典株和变异株传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗

说明书

本发明公开了一种同时表达经典株和变异株传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，属于兽用生物制品领域。本发明将含传染性法氏囊病毒经典株的VP2蛋白与LTB融合表达盒敲入火鸡疱疹病毒的US2病毒复制非必需区，将变异株的VP2蛋白与LTB融合表达盒插入至US10病毒复制非必需区。最终获得的重组病毒在CEF细胞中同时高效表达IBDV经典株和变异株的LTB‑VP2融合抗原蛋白。本发明制备的疫苗能提高免疫后的抗体水平，提高免疫后抗体的整齐度，保证疫苗的免疫效果，此疫苗具有高效、安全性好且一次接种终生免疫的优点，对雏鸡不会造成临床反应和病理损伤，疫苗保护率均达到100％。

技术领域

本发明涉及一种同时表达经典株和变异株传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，属于兽用生物制品领域。

背景技术

传染性法氏囊病毒(Infectious Bursal Disease Virus，IBDV)主要感染对象为3-6周龄的雏鸡，感染后导致鸡的免疫器官严重受损，使机体产生免疫抑制，最终导致雏鸡死亡。传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease，IBD)导致的高死亡率使全球的养禽业遭受了严重的经济损失，与鸡新城疫病、鸡马立克氏病并列为三大危害家禽健康的传染病。

IBDV有两种血清型，引发IBD的主要为血清I型。血清I型IBDV分为经典株、超强株、减毒株和变异株4个分支。IBDV新型变异株引起的非典型IBD的危害不容忽视。虽然IBDV新型变异株致死率低，但因引起的不可逆的法氏囊损伤和其严重的免疫抑制，导致鸡群免疫力低下，增加了其他病原的感染几率，影响鸡群的生长，导致体重下降、均匀度变差、料肉比升高等，严重影响了经济效益。另一方面，IBDV新型变异株会干扰其它重要疫病疫苗的免疫效果。有报道显示，禽流感H5/H7二联疫苗的抗体产生会被IBDV新型变异株的感染干扰。我国新流行的IBDV变异株属于IBDV新型变异株。

血清I型的IBDV有四种病毒蛋白质，分别为VP1、VP2、VP3和VP4，4种蛋白质的分子量分别约为90-92KD，41-48KD，32KD和28-32KD。研究显示IBDV新型变异株与超强株vvIBDV存在不同的单抗反应谱，VP2的318和323位氨基酸突变是IBDV新型变异株逃匿vvIBDV抗体中和活性的关键因素之一，导致部分免疫vvIBDV的疫苗的鸡群依旧感染IBDV新型变异株，是导致IBDV新型变异株在全国范围内流行的重要原因。

VP2是IBDV主要的结构蛋白，同时也是主要的保护性抗原。VP2蛋白可变区的两个疏水基团赋予IBDV构象依赖性和高度疏水性，它可以诱导宿主机体产生中和抗体，还与病毒的细胞嗜性、病毒毒性等有关。VP2蛋白与毒力相关的表位位于可变区内，有研究报道其第253，279，284位氨基酸是影响IBDV毒力的关键位点。因此，如何保证VP2刺激机体产生的抗体能够抵抗不同的流行毒株成为了一个亟待解决的难题。

大肠杆菌的不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin，LT)和霍乱弧菌的霍乱毒素(cholerae entertoxin，CT)是已知的有效的粘膜免疫佐剂，LT的B亚单位主要识别肠粘膜上皮细胞膜的受体神经节苷脂GM1，并与之结合形成复合物，本身不具有毒性。故LTB作为粘膜佐剂研究中表现出高活性及无毒性受到广泛关注表明LTB能够有效的促进和提升机体的特异性免疫应答。专利号为CN102688487A将鸡IBDV超强毒的VP2蛋白与具有粘膜免疫佐剂大肠杆菌LTB蛋白融合表达，表达产物乳化制备疫苗，结果各疫苗免疫组均能抵抗强毒攻击，具有良好的免疫原性。

火鸡疱疹病毒(turkey herpesvirus，HVT)为马立克氏病毒(Marek’s disease，MDV)其中的一种α疱疹病毒，因其与MDV抗原相关性，同时又由于HVT与MDV有明显区别对鸡无致病性，被广泛用作预防马立克氏病(MD)的活疫苗。因此如何能够以火鸡疱疹病毒(HVT)为载体进行鸡传染性法氏囊病(IBD)的活疫苗研究成为一项重要的研究方向。