[发明专利]一种石蜡包埋组织的DNA提取试剂盒以及提取方法在审

申请号：	202111302534.6	申请日：	2021-09-26
公开（公告）号：	CN113846143A	公开（公告）日：	2021-12-28
发明（设计）人：	赵瑾;盛巧芸;蒋亚辉;张丽;缪其杰	申请（专利权）人：	南京兔牙生物科技有限公司
主分类号：	C12Q1/6806	分类号：	C12Q1/6806;C12Q1/6858;C12N15/10;C12N15/11;C40B50/06
代理公司：	暂无信息	代理人：	暂无信息
地址：	210032 江苏省南***	国省代码：	江苏;32
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摘要：
搜索关键词：	一种石蜡包埋组织 dna 提取试剂盒以及方法
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【权利要求书】：

1.一种石蜡包埋组织的DNA提取试剂盒，其特征在于，包括：

脱蜡剂，用于对样本进行脱蜡处理；

裂解缓冲液和蛋白酶，用于对样本进行消化处理；

结合缓冲液和磁珠，用于对消化产物中的DNA进行结合；

洗涤液和乙醇，用于对结合了DNA的磁珠进行洗涤；

洗脱液，用于将磁珠上结合的DNA进行洗脱。

2.根据权利要求1所述的蜡包埋组织的DNA提取试剂盒，其特征在于，所述的脱蜡剂是二甲苯。

3.根据权利要求1所述的蜡包埋组织的DNA提取试剂盒，其特征在于，所述的裂解缓冲液中包含：5-50mmol/L的Tris-HCl；1-5mmol/L的NaCl；5-20mmol/L的EDTA；8-50mmol/L的DTT；3-5mol/L的异硫氰酸胍；0.5％-2％的SDS；1％-5％的TritonX-100。

4.根据权利要求1所述的蜡包埋组织的DNA提取试剂盒，其特征在于，所述的蛋白酶是蛋白酶K。

5.根据权利要求1所述的蜡包埋组织的DNA提取试剂盒，其特征在于，所述的组合缓冲液中包含：100-200mmol/L的Tris-HCl；1-5mmol/L的NaCl；1％-5％的TritonX-100；2-4mol/L的异硫氰酸胍；20-40％的异丙醇。

6.根据权利要求1所述的蜡包埋组织的DNA提取试剂盒，其特征在于，所述的洗涤液包括第一洗涤液和第二洗涤液，第一洗涤液中包含：100-200mmol/L的Tris-HCl；1-5mmol/L的NaCl；40-60％的乙醇；2-4mol/L的异硫氰酸胍；第二洗涤液中包含：25-75mmol/L的Tris-HCl；75-85％的乙醇。

7.根据权利要求1所述的蜡包埋组织的DNA提取试剂盒，其特征在于，所述的乙醇是无水乙醇；所述的洗脱液无核酸酶水。

8.一种石蜡包埋组织的DNA提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1，将组织样本中加入脱蜡剂，涡旋后加热处理，离心后除上清，再加入乙醇涡旋，离心后除上清，干燥处理；

步骤2，步骤1中得到的样本中加入裂解缓冲液和蛋白酶，孵育处理；

步骤3，步骤2中得到的样本中加入结合缓冲液和磁珠，孵育处理；

步骤4，步骤4中得到的样品于磁力架上除上清，依次通过洗涤液和乙醇进行洗涤后，于磁力架上除上清；

步骤5，步骤4中得到的样本中加入洗脱液，孵育后，取上清。

9.根据权利要求8所述的石蜡包埋组织的DNA提取方法，其特征在于，所述的步骤1中，涡旋时间5-20s，离心力10000-20000g，单次离心时间1-15min；加热处理中是在35-60℃处理5-20min；

所述的步骤2中，孵育处理过程是45-65℃、500-1500rpm转速下处理1-2h，再升温至85-95℃，在200-500rpm转速下处理5-15min。

10.根据权利要求8所述的石蜡包埋组织的DNA提取方法，其特征在于，所述的步骤3中，孵育处理是室温下处理1-30min；

所述的步骤4中，洗涤过程中依次采用第一洗涤液、第二洗涤液和乙醇洗涤，每次洗涤中涡旋1-30s，并孵育1-5min；

所述的步骤5中，孵育1-10min。