[发明专利]CRISPR寡核苷酸和基因剪辑在审
| 申请号： | 202111303287.1 | 申请日： | 2015-10-09 |
| 公开（公告）号： | CN113930455A | 公开（公告）日： | 2022-01-14 |
| 发明（设计）人： | N·拉文德尔;K·海尔;郭奕柱;梁锡权;R·波特 | 申请（专利权）人： | 生命技术公司;赛默飞世尔科技金尔特有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90 |
| 代理公司： | 中国贸促会专利商标事务所有限公司 11038 | 代理人： | 张小勇 |
| 地址： | 美国加*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | crispr 寡核苷酸 基因 剪辑 | ||
1.一种在细胞中进行同源重组的方法，该方法包括：
(a)将Cas9蛋白/gRNA复合物引入细胞中，该复合物能够在细胞内存在的核酸分子中的目标基因座处产生双股断裂以产生切割的核酸分子，以及
(b)将供体核酸分子引入细胞，
其中步骤(a)在步骤(b)之前进行或其中步骤(b)在步骤(a)之前进行。
2.一种在细胞中进行同源重组的方法，该方法包括：
(a)使细胞与线性DNA区段在允许细胞吸收线性DNA区段的条件下接触，所述线性DNA区段在两个末端与目标基因座具有序列同源性，
(b)等待一段时间，以及
(c)使细胞与Cas9蛋白/gRNA复合物在允许Cas9蛋白/gRNA复合物被细胞吸收并切割目标基因座的条件下接触，
其中步骤(a)在步骤(c)之前进行或其中步骤(c)在步骤(a)之前进行。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中在权利要求1的引入步骤或权利要求2的接触步骤之间进行洗涤步骤。
4.根据权利要求1或3所述的方法，其中通过电穿孔或转染来进行引入。
5.根据权利要求2或3所述的方法，其中允许吸收线性DNA和Cas9蛋白/gRNA复合物的条件是电穿孔或转染条件。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其中在转染试剂的存在下来进行转染。
7.根据权利要求4或5所述的方法，其中使用1150伏、20ms和2个脉冲进行电穿孔。
8.根据权利要求1所述的方法，其中供体核酸分子含有化学修饰。
9.根据权利要求1所述的方法，其中化学修饰包括硫代磷酸酯基团。
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