[发明专利]一种枯草芽孢杆菌的胞外抗菌蛋白质及其应用

说明书

本发明属于生物领域，具体涉及一种枯草芽孢杆菌的胞外抗菌蛋白质及其应用。该胞外抗菌蛋白质，其由枯草芽孢杆菌NH‑6分泌得到，所述胞外抗菌蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。该胞外抗菌蛋白质对玉米纹枯病菌和番茄灰霉病菌具有抑制作用，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于生物领域，具体涉及一种枯草芽孢杆菌的胞外抗菌蛋白质及其应用。

背景技术

玉米纹枯病(corn sheath blight)在中国最早于1966年在吉林省有发生报道。20世纪70年代以后，由于玉米种植面积的迅速扩大和高产密植栽培技术的推广，玉米纹枯病发展蔓延较快，已在全国范围内普遍发生，且危害日趋严重。一般发病率在70%~100%，造成的减产损失在10%-20%，严重的高达35%。由于该病害危害玉米近地面几节的叶鞘和茎杆，引起茎基腐败，破坏输导组织，影响水分和营养的输送，因此造成的损失较大。

灰霉病是番茄上危害较重且常见的病害，各菜区都发生。除危害番茄外，还可危害茄子、辣椒、黄瓜、瓠瓜等20多种作物。低温、连续阴雨天气多的年份危害严重。番茄灰霉病是大棚栽培番茄的重要病害，病菌主要侵害果实，侵染由残留的花及花托向果实或果柄扩展，使果皮成为灰白色水渍状，变软腐烂;以后在果面、花萼及果柄上出现大量灰褐色霉层，果实失水僵化。灰霉病也为害茎叶，成株期病斑识见于叶片，由边缘向里呈V字型发展，并产生深浅相同的轮纹，表面着生少量灰霉，叶片最后枯死。

已有研究报道枯草芽孢杆菌NH-6菌株表现出广谱的抑菌活性，然而枯草芽孢杆菌的抗菌原理，胞外蛋白质有何特性还亟需探索与研究。

发明内容

本发明的目的在于，研究枯草芽孢杆菌NH-6菌株分泌出的胞外蛋白的特性，开创性的发现了一种新的胞外抗菌蛋白质，该胞外抗菌蛋白质对玉米纹枯病菌和番茄灰霉病菌有抑制作用。

具体的，本发明的技术方案如下：

本发明第一个方面公开了一种胞外抗菌蛋白质，其由枯草芽孢杆菌NH-6分泌得到，其特征在于，所述胞外抗菌蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

应当理解，与序列SEQ ID NO：1具有85%以上同源性且具有相同功能的蛋白质也在本发明的保护范围之内。

本发明第二个方面公开了一种制备上述的胞外抗菌蛋白质的方法，包括以下步骤：

S1：发酵枯草芽孢杆菌NH-6得到发酵菌液；

S2：将发酵菌液离心得到上清液，采用硫酸铵分级沉淀的方法分离得到胞外抗菌蛋白质。

优选的，S2包括：

S21：将发酵菌液离心得到上清液；

S22：在20-30℃的条件下，一边搅拌一边往上清液中加入硫酸铵，待硫酸铵饱和度达到10％时停止加入，再次离心，收集沉淀，即得到0-10％盐析沉淀物；

S23：在离心得到的上清液中继续加入硫酸铵至硫酸铵饱和度达到20％时停止加入，再次离心，收集沉淀，即得到10-20％盐析沉淀物；

S24：重复以上步骤，依次获得20-30％，30-40％，40-50％，50-60％等级盐析沉淀物；

S25：将得到的50-60％等级盐析沉淀物纯化分离得到所述胞外抗菌蛋白质。

更优选的，S25中的纯化分离方法为薄层层析法。

本发明第三个方面公开了一种抑菌产品，所述产品包括上述的胞外抗菌蛋白质或上述制备得到的胞外抗菌蛋白质。